手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號(hào)：chem17
掃碼關(guān)注視頻號(hào)
以下通用步驟可以在保持細(xì)胞完整性的同時(shí)從培養(yǎng)器皿中分離多種細(xì)胞系。但這一步驟不能廣泛適用于所有細(xì)胞系。應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定不同體系所需的佳條件和濃度。
?在傳代培養(yǎng)時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞存活率。
?細(xì)胞存活率應(yīng)大于90%。
?對(duì)于無(wú)血清培養(yǎng)基，建議降低胰酶用量。
1.去除器皿中原有細(xì)胞培養(yǎng)基。
2.用不含鈣鎂的平衡鹽溶液或EDTA清洗細(xì)胞。將清洗溶液加到培養(yǎng)瓶中與細(xì)胞相對(duì)的一側(cè)。搖動(dòng)培養(yǎng)瓶1-2分鐘以沖洗細(xì)胞層，然后倒掉清洗溶液。
3.在培養(yǎng)瓶中與細(xì)胞相對(duì)的一側(cè)以2-3ml/25cm2的比例加入選定的解離溶液(見(jiàn)下表)。確保解離溶液能夠覆蓋整個(gè)細(xì)胞層。在37℃下孵育培養(yǎng)瓶。并輕輕搖動(dòng)。通常細(xì)胞在5-15分鐘內(nèi)解離。不同細(xì)胞系的解離時(shí)間有所不同。仔細(xì)觀測(cè)解離過(guò)程，以免損傷細(xì)胞。對(duì)于難從基質(zhì)上解離下來(lái)的細(xì)胞系，可以輕敲培養(yǎng)瓶以加快解離過(guò)程。
4.當(dāng)細(xì)胞解離時(shí)，豎直放置培養(yǎng)瓶使細(xì)胞流向培養(yǎng)瓶底部。向培養(yǎng)瓶中加入培養(yǎng)基。反復(fù)吹吸單層表面以分散細(xì)胞。計(jì)算細(xì)胞個(gè)數(shù)，然后傳代培養(yǎng)細(xì)胞。
注意：如果使用無(wú)血清培養(yǎng)基，應(yīng)加入大豆胰酶抑制劑。對(duì)于0.25mg/ml的胰酶抑制劑，一般按1：1(體積比)的比例加入即可抑制胰酶。細(xì)胞
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購(gòu)中心