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蛋白純化填料要利用不同蛋白間內(nèi)在的相似性與差異，利用各種蛋白間的相似性來除去非蛋白物質(zhì)的污染，而利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來。每種蛋白間的大小、形狀、電荷、疏水性、溶解度和生物學(xué)活性都會(huì)有差異，利用這些差異可將蛋白從混合物如大腸桿菌裂解物中提取出來得到重組蛋白。
蛋白的純化大致分為粗分離階段和精細(xì)純化階段二個(gè)階段。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細(xì)胞成分如DNA、RNA等分開，由于此時(shí)樣本體積大、成分雜，要求所用的樹脂高容量、高流速，顆粒大、粒徑分布寬.并可以迅速將蛋白與污染物分開，防止目的蛋白被降解。精細(xì)純化階段則需要更高的分辨率，此階段是要把目的蛋白與那些大小及理化性質(zhì)接近的蛋白區(qū)分開來，要用更小的樹脂顆粒以提高分辨。
蛋白純化填料系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)步驟：
1.如果凝膠過濾的介質(zhì)是干粉，則需在凝膠過濾緩沖液中溶脹。
2.在遠(yuǎn)離過往通道及直接光照的恒溫環(huán)境，將層折柱垂直安裝在穩(wěn)固的實(shí)驗(yàn)室支架上。
3.用一注射器將凝膠過濾緩沖液從柱子的輸出管注入柱子，至緩沖液達(dá)到柱子支持體平面之上，注射器留在輸出端以堵住柱子。
4.沿著一根順柱子內(nèi)壁而放的玻璃棒將凝膠混懸物倒入柱子至所設(shè)高度，再小心往凝膠頂部加入1 cm 高的一層緩沖液，并連接緩沖液貯存容器，取去堵著柱子輸出管的注射器，用2~3倍柱床體積的緩沖液請(qǐng)洗柱子。
5.流盡柱子凝膠頂部上面的緩沖液、關(guān)閉其輸出管。
6.加入相當(dāng)于柱床體積1%~5%的蛋白質(zhì)樣品。開放輸出管，讓樣品流進(jìn)柱床，凝膠上面的柱子內(nèi)壁以緩沖液沖洗。
7.在凝膠頂上用吸管加入1 cm 高的緩沖液層，重新與緩沖液貯存容器連接，開始洗脫。
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