SDS-PAGE蛋白加樣緩沖液(5×,含TCEP)

產(chǎn)品貨號：T15336

產(chǎn)品規(guī)格：2ml/10ml/15ml

產(chǎn)品簡介：

蛋白上樣緩沖液主要由TRIS、SDS、溴酚藍、還原劑等組成。SDS可與蛋白質結合使蛋白質-SDS復合物上帶有大量的負電荷，這使蛋白質本身的電荷被SDS掩蓋，消除了各種蛋白質本身電荷的差異；SDS還可以斷開分子內(nèi)和分子間的氫鍵，破壞蛋白質分子的二級結構和三級結構。還原劑可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵，破壞蛋白質結構，消除了蛋白結構之間的差異，最終無電荷及結構上差異的蛋白（亞單位），電泳速度只是與其分子量大小有關。溴酚藍作為電泳指示劑，可大概指示電泳結束的時間。

SDS-PAGE蛋白加樣緩沖液(5×,含TCEP)即SDS-PAGE Sample Loading Buffer(5×,with TCEP)，是一種經(jīng)過改良的更加安全、更加健康的無氣味的以溴酚藍為染料，5倍濃縮的蛋白上樣緩沖液。

本產(chǎn)品使用了無氣味、水溶性更穩(wěn)定、還原能力相近的還原劑[三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽,TCEP]替代了有氣味的D-二硫蘇糖醇(DTT)或β-巰基乙醇(2-Mercaptoethanol)，從而可以確保本SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液在正常使用或加熱時都不會有異味，使蛋白上樣操作更加安全健康。該試劑僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

操作步驟(僅供參考):

1. 在室溫或不超過37℃的水浴中溶解SDS-PAGE蛋白加樣緩沖液(5x含TCEP)，水浴溶解后立即室溫存放，盡量避免長時間置于水浴中。使用完畢后應置于-20℃保存。

2. 取適量的蛋白樣品和SDS-PAGE Sample Loading Buffer(5x)按4:1混合，充分混勻。如40ul蛋白樣品加入 10ul上樣緩沖液(5倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度過高，可用雙蒸水稀釋。

3. 95℃水浴加熱5~10min，以充分變性蛋白。

4. 冷卻到室溫后，經(jīng)10000~14000rpm離心2~5min，取上清直接上樣電泳。

5. 通常電泳至藍色染料到達膠的底部附近即可停止電泳。

注意事項:

1. 本產(chǎn)品用于蛋白變性時，建議95°℃水浴或PCR儀加熱5分鐘，溫度過高(如100°℃或時間過長(如超過15分鐘)，有可能會導致蛋白降解或上樣緩沖液中指示劑的顏色異常。

2. SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5×，含TCEP)中不含劇毒的巰基乙醇和有刺激性氣味的DTT，但還原效果一致，對于蛋白樣品的處理效果和電泳效果一致。

3. SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5×，含TCEP)必須溶解后再使用。建議根據(jù)使用量和頻率分裝凍存，應避免反復凍融。

4. 本產(chǎn)品含有溴酚藍指示劑，pH受溫度影響，顏色可能有所不同;低溫凍存條件下，呈深棕色~深藍色凝固狀態(tài)，不影響正常使用。

5. 本產(chǎn)品稀釋至1×后可以直接用于細胞或組織樣品的裂解。

6. 加熱前通常會發(fā)現(xiàn)蛋白樣品內(nèi)有粘稠的半透明狀物體，通常在本上樣緩沖液內(nèi)95℃水浴加熱8~10分鐘后可使該粘稠的半透明狀物體消失，便于后續(xù)的上樣操作。如果起始時細胞或組織的用量較大基因組DNA含量較高，加熱5~10分鐘后有可能仍然比較粘稠或者有粘稠狀的半透明物體，此時需要再加熱5-10分鐘或者加入適量1×的蛋白上樣緩沖液后再加熱3~5分鐘。充分加熱后一方面可以使結合在基因組DNA上的蛋白充分釋放，同時會導致基因組DNA的部分斷裂從而使粘稠感消失，這樣就不會影響后續(xù)的上樣操作了。適當超聲或使用1ml注射器反復抽吸也可以打斷基因組DNA從而使粘稠感消失。

7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：12個月有效。