Elisa試劑盒過(guò)程：

一、固定：PBS 5min×3次 振蕩洗刷制作好的細(xì)胞爬片。固定液掩蓋細(xì)胞，RT 靜置15min。PBS 5min×3次 振蕩洗刷。

二、通透化：通透液掩蓋細(xì)胞，RT 靜置30min。PBS 5min×3次 振蕩洗刷。

三、封閉：封閉液掩蓋標(biāo)本表面37℃孵育1h。

四、一抗孵育：一抗以適宜濃度稀釋PBS，掩蓋標(biāo)本表面。4℃孵育過(guò)夜，第二天37℃復(fù)溫1h。PBS 5min×3次 振蕩洗刷。

五、TSZ Elisa試劑盒二抗孵育：fitC符號(hào)二抗以適宜濃度稀釋于PBS，掩蓋標(biāo)本表面。37℃避光孵育<60min。PBS 5min×3次 避光 振蕩洗刷。

六、染核：新鮮稀釋Hoechst掩蓋細(xì)胞表面，RT避光靜置<10min。PBS 5min×3次 避光 振蕩洗刷。

七、封片：在潔凈的載玻片上滴一滴封片劑，將爬片的細(xì)胞面扣在封片劑上。

八、鏡檢：4℃避光保存。

注：

1、細(xì)胞密度要適宜，狀態(tài)較好。

2、從孵育二抗開始要避光(封閉室內(nèi)日光燈即可)。

3、完成后及時(shí)鏡檢，照相;分別用不同波長(zhǎng)激起熒光，在Photoshop軟件下組成一張圖。

試劑制造：

1、通透液：0.5 %(v/v)TritonX-100/PBS

2、封閉液：正常山羊血清稀釋于PBS;或商品化封閉液制品。

3、Hoechst：Hoechst33258即可。

4、TSZ Elisa試劑盒封片劑：50%(v/v)甘油/PBS。