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小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)RAW264.7的培養(yǎng)注意事項(xiàng)和要點(diǎn)
小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)RAW264.一般為圓形或橢圓形，小而透亮。因?yàn)槠渚哂休^強(qiáng)的吞噬能力，并在吞噬抗原后釋放趨化因子，促使細(xì)胞分化出偽足，粘附攀爬能力也因此增強(qiáng)。若細(xì)胞吞噬抗原過(guò)多、培養(yǎng)環(huán)境惡劣就會(huì)促使細(xì)胞呈現(xiàn)出梭形、長(zhǎng)梭形，鏡下觀察就會(huì)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)變?yōu)樗笮吻颐娣e變大，不再是具有細(xì)長(zhǎng)偽足的類圓形小細(xì)胞。這也是出現(xiàn)消化困難的一個(gè)主要原因。
小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)RAW264.7的培養(yǎng)注意事項(xiàng)和要點(diǎn)：
1.由于RAW264.7細(xì)胞易有不同形態(tài)，傳代時(shí)就會(huì)發(fā)現(xiàn)形態(tài)變?yōu)樗笮蔚募?xì)胞很難消化下來(lái)，輕敲培養(yǎng)皿細(xì)胞不會(huì)脫落，用力吹打又容易對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生較大損傷，因此要盡量避免細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變。即在接種細(xì)胞時(shí)保持一個(gè)適中的傳代密度，避免其向終末細(xì)胞分化，因?yàn)橐坏┘?xì)胞發(fā)生分化變?yōu)殚L(zhǎng)形是無(wú)法恢復(fù)的，這是培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞時(shí)最需要注意的問題。
2.RAW264.7細(xì)胞喜歡連片生長(zhǎng)，正常狀態(tài)下應(yīng)該是一小片一小片的分布在培養(yǎng)皿中，片片之間不相連接，等到長(zhǎng)到更多更密的時(shí)才會(huì)連成大片，但同時(shí)也會(huì)疊加成層，容易出現(xiàn)部分細(xì)胞飄起無(wú)法貼壁的問題。所以，要關(guān)注好細(xì)胞的匯合程度，控制好細(xì)胞的生長(zhǎng)速度，不能等到疊加成層時(shí)才去傳代。
3.RAW264.7細(xì)胞傳代后貼壁時(shí)間較短，半小時(shí)左右絕大部分細(xì)胞就能夠貼下去，剛貼壁時(shí)細(xì)胞呈圓形，折光度很好，鏡下觀察如小珍珠狀一個(gè)個(gè)地散落于培養(yǎng)皿中。生長(zhǎng)一段時(shí)間后，部分細(xì)胞會(huì)變成類似四角形，伸出偽足之類的。這個(gè)時(shí)候就是在提醒你注意傳代了，此時(shí)無(wú)論匯合度如何都需要進(jìn)行傳代了，因?yàn)樾螒B(tài)發(fā)生改變的細(xì)胞對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)產(chǎn)生較大影響，最終造成實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不理想。
4.在細(xì)胞生長(zhǎng)的初始階段，細(xì)胞以貼壁的形式生長(zhǎng)并呈現(xiàn)出長(zhǎng)方體的形態(tài)和有“偽足”延伸。隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，細(xì)胞呈現(xiàn)圓形并以疊加的形式生長(zhǎng)。細(xì)胞密度達(dá)到一定的程度，會(huì)有細(xì)胞以懸浮的方式散落到到培養(yǎng)基中，鏡下觀察會(huì)同時(shí)出現(xiàn)懸浮和貼壁兩種形態(tài)。
5.該細(xì)胞傳代時(shí)不需要用胰酶消化。傳代時(shí)，吸走部分培養(yǎng)液，留下少許培養(yǎng)液（例如使用T25培養(yǎng)瓶留下2 ml），用無(wú)菌細(xì)胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落，充分吹打后接種到新的裝有新鮮培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，混勻后進(jìn)行培養(yǎng)。
6.該細(xì)胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當(dāng)細(xì)胞密度較大時(shí)，細(xì)胞會(huì)輕微脫落變圓或者許多細(xì)胞堆積在一起，有些細(xì)胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細(xì)胞是存活的，在傳代時(shí)應(yīng)收集起來(lái)，離心后細(xì)胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。
7.血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞貼壁能力變化，建議選用高質(zhì)量的胎牛血清。
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