細胞凍存的操作步驟是什么？

來源：天津研晟科技有限公司 2022年09月20日 09:54

　　1、配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；

　　2、取對數(shù)生長期的細胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。

　　3、去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細胞消化下來；

　　4、離心1000rpm，5min；

　　5、去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；

　　6、細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5ml；

　　7、在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；

　　8、凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

　　注意事項

　　1、從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養(yǎng)細胞用于凍存，最好為對數(shù)生長期細胞。在凍存前一天最好換一次培養(yǎng)液；

　　2、將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作，以免凍傷；

　　3、凍存和復蘇最好用新配制的培養(yǎng)液。

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