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柱外體積（ECV）是指色譜系統(tǒng)從進樣器到檢測器這段管路除去色譜柱的總體積。大部分新的高效液相色譜系統(tǒng)都經過了優(yōu)化，因此，可以使用高效的核殼顆粒（SPP）色譜柱，例如HALO。
現在讓我們簡單概述一下高效液相色譜系統(tǒng)。一個典型的HPLC系統(tǒng)由脫氣機、泵、自動進樣器、柱溫箱和檢測器。我們可以仔細看一下里面。
柱外體積通常來自進樣器，包括進樣器本身、連接進樣器與色譜柱的管路以及連接色譜柱與檢測器的管路、檢測器流通池、熱交換器以及各個連接配件所產生的任何體積。
但是有很多舊的色譜儀仍在使用。舊的色譜儀使用顆粒更大、長度更長的色譜柱，因此進樣器和管路的柱外體積對分離度和峰寬的影響比較小。在切換到更短的SPP色譜柱時，需要減少柱外體積，以避免峰值展寬，從而降低分離度以及定量結果的準確度。
為了使色譜柱獲得良好的性能，應該盡量減少柱外體積，以獲得色譜柱的最佳分離。通常，需要將柱外體積降至總峰值體積的一半以下，以獲得色譜柱最大分離效果。
當在常規(guī)的HPLC儀器上使用高效的SPP色譜柱（如HALO）時，我們建議您按照以下幾個步驟進行系統(tǒng)優(yōu)化。先從簡單、便宜的優(yōu)化開始，然后根據需要再進行更復雜和更昂貴的優(yōu)化。一旦您取得了可以接受的結果，您可以選擇放棄后續(xù)的優(yōu)化。
第一，減少檢測器的響應時間，提高數據采集頻率。將檢測器響應時間設置為小于0.1秒，并且數據采集頻率大于20Hz。例如，在這個色譜疊加圖中，您可以清楚地看到，隨著數據采集頻率的提高，塔板數也從11000增加到38000。
第二，將進樣體積減少到最小，并確保能達到可接受的峰值響應。
第三，確保樣品溶劑強度比流動相弱。如果這不能滿足，那么需要對您的進樣體積有所限制。如果是梯度分離，那么您能夠注入比等度分離更多的樣品。然而，保持樣品溶劑強度小于初始流動相的強度仍然是重要的。
第四，使用體積更小，長度更短的管路。
第五，使用更小的流通池。
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