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在前幾期，我們重點為大家介紹并推薦了適用于中草藥檢測的各類安捷倫色譜柱，以便大家在日后的檢測工作中匹配使用。本期將繼續(xù)帶來適用于葛根配方顆粒檢測的色譜柱推薦，跟上我們，精彩繼續(xù)！
Agilent 在 2003 年首家推出了亞 2 微米粒徑的色譜柱，由此掀開了超高效液相色譜分離（UHPLC）的序幕。ZORBAX 系列的 UHPLC 色譜柱中，分為快速高通量分離（RRHT）和超高壓快速高分離度（RRHD）兩個系列，高壓力耐受分別為 600bar 和 1200bar。ZORBAX RRHD Plus C18 和 SB C18 是中藥配方顆粒中常用 UHPLC 色譜柱。本實驗選用的色譜柱 ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18，其固定相表面通過致密鍵合和雙封端處理，對中藥中生物堿、皂苷、黃酮、萜類等成分具有優(yōu)異的峰形和分離度。
根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局 《國家藥品標準》中葛根配方顆粒的檢測項目，對其特征譜圖和含量測定都采用 UHPLC 方法。特征譜圖和含量測定中要求理論板數(shù)按葛根素峰計算應不低于 4000，供試品呈現(xiàn)的特征峰保留時間應與對照品相對應，相對保留時間在規(guī)定范圍內(nèi)（±10%）。本文采用 1290 Infinity II 超高效液相色譜儀以及 ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18 ，2.1x100mm，1.8μm 色譜柱對葛根配方顆粒的特征譜圖進行了分析，并對葛根配方顆粒中葛根素的含量進行了測定。此外，我們也對該方法進行了加速，能夠?qū)崿F(xiàn)更快速的分析。
1
特征譜圖
實驗結(jié)果
圖 1. 葛根配方顆粒標準對照譜圖、供試品重現(xiàn)譜圖、色譜柱替代后供試品特征譜圖及方法再加速的供試品特征圖譜比較 （峰 3(S):葛根素；峰 8:黃豆苷元）
色譜條件：
標準方法：
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色譜柱：BEH C18 (2.1x100mm, 1.7 μm)
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流動相：A：乙腈；B：H2O（0.1%磷酸）
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梯度：0-10min,94%-91%B；10-14min,91%B-89%B；14-22min,89-70%B；22~27min,70%B; 后運行，5min
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流速：0.4ml/min
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柱溫：30 °C
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檢測波長：250 nm(4nm), Ref: 400 ±50 nm; 采樣頻率：40Hz
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進樣量：1 μL
替代方法：
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色譜柱：ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18, 2.1x100mm, 1.8μm；
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柱溫：40℃
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其余同上。
加速方法：
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色譜柱：ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18, 2.1x100mm, 1.8μm；
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梯度：0~6.7min，94%-91%B；6.7-9.5min，91%B-89%B；9.5-14.9min,89-70%B；14.9-18.3min，70%B; 后運行，3 min
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流速：0.6ml/min
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柱溫：40℃
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其余同上。
系統(tǒng)適用性測試：
表 1. 替代色譜柱后方法的系統(tǒng)適用性測試結(jié)果
表 2. 加速方法的系統(tǒng)適用性測試結(jié)果
結(jié)果
1）采用 ZORBAX Eclipse Plus C18 柱，特征圖譜中各個特征峰的相對保留時間*在標準規(guī)定范圍內(nèi)，可以替代原標準中推薦色譜柱；
2）對比原標準方法和色譜圖，特征峰 8 明顯為疊加峰，采用替代色譜柱和方法能夠較好將特征峰 8 分離成 2 個峰，兩個特征峰 UV 光譜相似，但不*相同，顯然通過替代色譜方法能更有效控制葛根配方顆粒產(chǎn)品質(zhì)量；
3） 特征圖譜方法即含量測定方法，采用替代色譜柱方法和加速方法時，目標峰的理論板數(shù)高于標準 10 倍以上，*滿足要求；
4） 加速方法分析時間縮短約 9 分鐘，且各特征峰的分離良好，相對保留時間仍在規(guī)定范圍內(nèi)。
實驗結(jié)論
本實驗選用 ZORBAX Eclipse Plus C18 色譜柱對葛根配方顆粒特征譜圖及含量進行了檢測，均符合標準要求。原方法流速較低（0.4 ml/min），分析時間較長。通過提升流速，分析時間減少約 9 分鐘，且相對保留時間、系統(tǒng)適應性試驗結(jié)果*滿足要求。
儀器系統(tǒng)及色譜柱推薦
1290 Infinity II 四元 UHPLC 系統(tǒng)：全能泵(G7104A)，自動進樣器（G7129B），柱溫箱(G7116B)，DAD(G7117A)
其它詳細操作可以參考 Agilent 配方顆粒圖譜集，或聯(lián)系 Agilent。
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