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高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測，從而實(shí)現(xiàn)對試樣的分析。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)應(yīng)用。
高效液相色譜儀分析時(shí)流動相的選擇原則：
1.選擇色譜醇的溶劑作為流動相
不要隨意加滿溶劑瓶。作為分析流動相，應(yīng)避免不必要的浪費(fèi)，防止污染環(huán)境，危害身體健康。應(yīng)該根據(jù)樣哦數(shù)量，計(jì)算需要使用的溶劑體積，添加適量流動相到試劑瓶中作為流動相。因?yàn)橛行┯袡C(jī)溶劑長期放置易變質(zhì)，比如四氫呋喃在光照下就容易變質(zhì)，甲醇或乙醇長期放置會生成酯類，乙腈水溶液會分解為醋酸與氨，在分析時(shí)導(dǎo)致基線抬高，對一些分析，特別是質(zhì)譜分析造成影響。
高效液相色譜流動相的選擇原則
2.配置某些酸或堿性流動相時(shí)要考慮色譜柱的使用pH范圍
有些酸并不適宜作為流動相，如鹽酸、長期使用可能損壞泵及相關(guān)的鋼制管線。注意選擇合適的截止波長的溶劑作為流動相。
紫外分析時(shí)，樣品的檢測波長至少應(yīng)大于所用溶劑的截止波長20nm上。
3.配置的鹽溶液一定用濾膜過濾
常規(guī)液相用0.45µm濾膜過濾，高效液相色譜使用0.2µm濾膜過濾。水或緩沖鹽溶液好置于棕色瓶中，以防長菌，阻塞溶劑過濾器，降低泵的操作性能。質(zhì)譜分析不能使用不揮發(fā)性鹽作為流動相。使用揮發(fā)性鹽作為流動相時(shí)，在保證分析的條件下，流動相中的鹽盡量保持低濃度。
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