一抗選擇的好壞對(duì)免疫組化實(shí)驗(yàn)的至關(guān)重要,一抗盡量選擇單克隆抗體,還要注意其抗體來(lái)源(兔抗、鼠抗或者其他)要與二抗匹配。一抗的選擇要點(diǎn)和技巧
1、單克隆和多克隆抗體的選擇
由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合,就像導(dǎo)dan精確地命中目標(biāo)一樣。另一方面,即使是同一個(gè)抗原決定簇,在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來(lái)產(chǎn)生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中,一般單克隆抗體特異性強(qiáng),但親和力相對(duì)小,檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強(qiáng),靈敏度高,但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過(guò)封閉等避免)。
2、種屬來(lái)源
一般兔來(lái)源的多是多克隆;而小鼠來(lái)源的多是單克隆,但也有另外。根據(jù)此來(lái)源來(lái)選擇相應(yīng)的二抗。
3、種屬反應(yīng)性的選擇
這一點(diǎn)很重要,表明這種抗體可能存在種屬差異,且這種抗體適合檢測(cè)哪種種屬動(dòng)物體內(nèi)的抗原。
4、應(yīng)用范圍的選擇
有的一抗只能用于 WB ( Western blotting)或免疫組化、免疫熒光、免疫沉淀等;甚至表明石蠟切片或冰凍切片。
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