中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(NAP)

產(chǎn)品貨號(hào)：R21901

產(chǎn)品包裝：4×10ml

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

    堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，簡(jiǎn)稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶，廣泛分布于哺乳動(dòng)物組織內(nèi)，其活性所需最適pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處(細(xì)胞膜)，如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細(xì)膽管膜以及微動(dòng)脈和毛細(xì)血管動(dòng)脈部之內(nèi)皮，還見于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細(xì)胞之中性顆粒以及平滑肌之細(xì)胞膜。

    尚寶生物 中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(NAP)不是采用金屬沉淀法來(lái)顯示堿性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時(shí)偶聯(lián)法)，其原理是在 pH9.2～9.8 的堿性條件下，細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶可使AB-BI磷酸鹽水解，釋放出磷酸與萘酚，后者與偶聯(lián)重氮鹽生成有色產(chǎn)物，定位于細(xì)胞質(zhì)中。該染液與門用于血液或骨髓細(xì)胞涂片的中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶染色, 堿性磷酸酶活性部位呈藍(lán)色，位于胞槳，結(jié)果較金屬鹽沉淀法可靠。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 載玻片

2. 4%多聚甲醛

3. 顯微鏡

操作步驟(僅供參考)：

(一)、涂片

1. 制備新鮮血液或骨髓細(xì)胞涂片，NAP固定液固定30～60s，充分水洗。

2. 滴加配制好的NAP孵育液，孵育15～20min，水洗。

3. 滴加核固紅染色液或甲基綠染色液復(fù)染3～5min。水洗、晾干、鏡檢。

(二) 貼壁培養(yǎng)細(xì)胞

1. 取6孔板或其他容器培養(yǎng)的細(xì)胞，棄液，PBS清洗干凈。

2. 加入NAP固定液固定30～60s或4%多聚甲醛固定10～15min，PBS清洗。

3. 滴加配制好的NAP孵育液，放入濕盒中，避光孵育15～20min，PBS清洗。

4. 入核固紅染色液或甲基綠染色液復(fù)染 3～5min。PBS清洗、鏡檢。

染色結(jié)果：

         NAP陽(yáng)性顆粒                   藍(lán)色

         細(xì)胞核                   紅色(核固紅)或綠色(甲基綠)

結(jié)果判斷：

一般以積分報(bào)告結(jié)果，根據(jù)100個(gè)中性粒細(xì)胞陽(yáng)性顆粒進(jìn)行0～4+計(jì)分。

           細(xì)胞分值            染色特點(diǎn)

               0               無(wú)顆粒

               1               稍有顆粒

               2             中等程度顆粒

               3               多數(shù)顆粒

               4               充滿顆粒

臨床意義：

1. 類白血病反應(yīng)積分明顯增高，未經(jīng)治療的慢性粒細(xì)胞白血病積分明顯減低。

2. 急性細(xì)菌性感染積分明顯增高，病毒性感染積分多正?；驕p低。

3. 再生障礙性貧血積分常增高，PNH、MDS積分常減低。

注意事項(xiàng)：

1. 血液或骨髓細(xì)胞涂片應(yīng)新鮮，薄厚適宜，及時(shí)固定，否則會(huì)影響酶的活性。

2. 培養(yǎng)細(xì)胞染色操作過(guò)程中，清洗、染色等步驟都應(yīng)輕微，以免損傷或丟失細(xì)胞。

3. NAP孵育液易失效或降低陽(yáng)性強(qiáng)度，即配即用，不宜久置。

4. 復(fù)染時(shí)，核固紅染色液或甲基綠染色液二者取其一。

5. 每次染色時(shí)，應(yīng)有陽(yáng)性對(duì)照片。

6. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

保存條件：

-20℃避光，6個(gè)月有效。