柱式組織基因組提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：28105

產(chǎn)品規(guī)格：100次/200次

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

　  本試劑盒適合于從新鮮或冷凍的動(dòng)物、人組織中提取高純度總DNA。本品可純化獲得分子量最大為50 kb的DNA片段，純化過(guò)程不需使用苯酚或氯仿等有毒溶劑，無(wú)需乙醇沉淀。本試劑盒采用優(yōu)化的緩沖體系使裂解液中的DNA高效特異的結(jié)合到硅基質(zhì)離心吸附柱上，PCR和其他酶促反應(yīng)的抑制劑可通過(guò)兩步洗滌步驟被有效去除，最后使用低鹽緩沖液或水洗脫，即可得到高純度DNA。純化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文庫(kù)構(gòu)建、Southern Blot、分子標(biāo)記等下游實(shí)驗(yàn)。

自備試劑：無(wú)水乙醇

包裝清單:

操作步驟：

1. 如果提取材料為動(dòng)物組織，取25mg（脾組織用量應(yīng)少于10mg）；如果材料為鼠尾，取一段長(zhǎng)度為0.4-0.6cm的大鼠鼠尾或兩段長(zhǎng)度為0.4-0.6cm的小鼠鼠尾。

a. 樣本進(jìn)行液氮研磨或切成小塊后置于1.5ml離心管中，加入180 μl Buffer GTL，將不同樣品做好標(biāo)記。

b. 若使用勻漿器處理樣本，勻漿前向樣本中加入不超過(guò)80 μl Buffer GTL，勻漿后加入100 μl Buffer GTL。

注意：

1) 確保各組織的量不要超出推薦范圍。

2) 組織樣本在加入Buffer GTL之前用液氮研磨或加入Buffer GTL用勻漿器勻漿處理，可以增加裂解效率。

2. 加入20 μl Proteinase K，渦旋震蕩使樣品*混勻。56℃水浴，直至組織*裂解，孵育過(guò)程中可每隔一段時(shí)間顛倒或震蕩離心管使樣品分散。

注意：

1) 不同組織消化時(shí)間不同，通常1-3小時(shí)即可完成，鼠尾需要消化6-8小時(shí)，必要時(shí)過(guò)夜消化，不會(huì)影響后續(xù)操作。

2) 如果孵育和渦旋震蕩后仍然有膠狀物質(zhì)，延長(zhǎng)56℃孵育時(shí)間或再加入20 μl Proteinase K消化。

3) 如需去除RNA，可在上述步驟完成后，加入4μl的濃度為100 mg/ml的RNase A溶液，渦旋15秒，室溫放置5-10分鐘。

3. 加入200 μl Buffer PG，渦旋震蕩充分混勻，70℃水浴10分鐘。短暫離心后加入200 μl無(wú)水乙醇，渦旋震蕩充分混勻。

注意：

1) 加入Buffer PG和無(wú)水乙醇后要立即渦旋震蕩混勻。

2) 加入Buffer PG和無(wú)水乙醇后可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。一些組織（如脾，肺）在加入Buffer PG和無(wú)水乙醇后可能形成溶膠狀產(chǎn)物，此時(shí)推薦進(jìn)行劇烈震蕩或渦旋處理。

4. 柱平衡：向已裝入收集管（Collection Tubes）中的吸附柱（Spin Columns）中加入200μl Buffer PS，12000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

5. 將步驟3所得溶液短暫離心，全部加入到已裝入收集管的吸附柱（Spin Columns）中，若一次不能加完溶液，可分多次轉(zhuǎn)入。12000 rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

6. 向吸附柱中加入450 μl Buffer PW（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），12000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

注意：如果純化的DNA用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn)（例如平末端連接或直接測(cè)序），建議加入Buffer PW靜置2-5分鐘再離心。

7. 重復(fù)步驟6。

8. 12000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液。

注意：

這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)（酶切、PCR等）。

9. 將吸附柱放到一個(gè)新的1.5 ml離心管（自備）中，向吸附膜中間位置懸空滴加50μl Buffer EB，室溫放置2分鐘。12000 rpm離心1分鐘，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。

注意：

1) 洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5之間（可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍）。

2) 為了提高基因組提取量，可將離心得到的溶液重新加到吸附柱中，室溫放置2分鐘，12000 rpm離心1分鐘。

3) 洗脫體積不應(yīng)小于30μl，體積過(guò)少會(huì)影響回收效率。

注意事項(xiàng) ：

1. 第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說(shuō)明在Buffer PW中加入無(wú)水乙醇（Buffer PW 100次包裝18ml，使用前加入72ml無(wú)水乙醇；Buffer PW 200次包裝36ml，使用前加入144ml無(wú)水乙醇）。

2. 所有離心步驟均可室溫下進(jìn)行。