柱式細(xì)胞基因組提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：28104

產(chǎn)品規(guī)格：50次/100次/200次

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

　  本試劑盒適合于從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中提取高純度總DNA。本品可純化獲得分子量最大為50 kb的DNA片段，純化過(guò)程不需使用苯酚或氯仿等有毒溶劑，無(wú)需乙醇沉淀。本試劑盒采用優(yōu)化的緩沖體系使裂解液中的DNA高效特異的結(jié)合到硅基質(zhì)離心吸附柱上，PCR和其他酶促反應(yīng)的抑制劑可通過(guò)兩步洗滌步驟被有效去除，最后使用低鹽緩沖液或水洗脫，即可得到高純度DNA。純化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文庫(kù)構(gòu)建、Southern Blot、分子標(biāo)記等下游實(shí)驗(yàn)。

包裝清單：

自備試劑：使用前Buffer PW 50次加入36ml無(wú)水乙醇/100次加入72ml無(wú)水乙醇/200次加入144ml無(wú)水乙醇。

操作步驟：

材料處理：

1. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)先處理為細(xì)胞懸液（最大提取量為5×10⁶個(gè)細(xì)胞），2000rpm（400×g）離心5分鐘，棄盡上清，加200 μl Buffer GL，振蕩至樣品*懸浮。

2. 如需去除RNA，可在上述步驟完成后，加入4μl的濃度為100 mg/ml的RNase A溶液，渦旋15秒。劇烈渦旋震蕩并用移液器吹打充分混勻，室溫放置5-10分鐘。

3. 柱平衡：向已裝入收集管（Collection Tubes）中的吸附柱（Spin Columns）中加入200μl Buffer PS，12000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

4. 將步驟3所得溶液短暫離心，全部加入到已裝入收集管的吸附柱（Spin Columns）中，若一次不能加完溶液，可分多次轉(zhuǎn)入。12000 rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

5. 向吸附柱中加入450 μl Buffer PW（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），12000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。  注意：如果純化的DNA用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn)（例如平末端連接或直接測(cè)序），建議加入Buffer PW靜置2-5分鐘再離心。

6. 重復(fù)步驟5。

7. 12000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液。

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)（酶切、PCR等）。8.將吸附柱放到一個(gè)新的1.5 ml離心管（自備）中，向吸附膜中間位置懸空滴加50μl Buffer EB，室溫放置2分鐘。12000 rpm離心1分鐘，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。

注意：1）洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5之間（可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍）。2）為了提高基因組提取量，可將離心得到的溶液重新加到吸附柱中，室溫放置2分鐘，12000 rpm離心1分鐘。3）洗脫體積不應(yīng)小于30μl，體積過(guò)少會(huì)影響回收效率。

注意事項(xiàng) ：

1. 第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說(shuō)明在Buffer PW中加入無(wú)水乙醇。

2. 所有離心步驟均可室溫下進(jìn)行。