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細(xì)胞學(xué)堂 | H22（小鼠肝癌細(xì)胞）腹水傳代怎么做？掌握這些就夠了
H22（小鼠肝癌細(xì)胞）分離自小鼠腹水，由大連醫(yī)科學(xué)院建立。在實(shí)驗(yàn)研究中，常將H22細(xì)胞接種于小鼠皮下，建立異位移植模型，廣泛用于抗腫瘤藥物藥效學(xué)初步篩選。
H22細(xì)胞基礎(chǔ)信息
生長(zhǎng)特性：
懸浮細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)：
淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)培養(yǎng)基：
RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S
推薦傳代比例：
3×10^5-5×10^5cells/mL
推薦換液頻率：
2~3次/周
凍存液：
55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
培養(yǎng)條件：
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
腹水傳代培養(yǎng)
了解完H22細(xì)胞的基礎(chǔ)信息，我們就可以著手準(zhǔn)備細(xì)胞培養(yǎng)了。普諾賽已經(jīng)為大家總結(jié)好了詳細(xì)的腹水傳代步驟，希望能對(duì)大家有所幫助!
1
H22體外培養(yǎng)至合適密度后，離心（1200r/min,3min）收集細(xì)胞，用PBS重懸備用；
2
取0.2mL培養(yǎng)好的細(xì)胞計(jì)數(shù)（細(xì)胞密度為1*10^7/mL）后，腹腔注射至小鼠腹腔；
3
飼養(yǎng)5-6天，小鼠腹水可收集（4-8mL）；
4
采用無(wú)菌抽取或解剖收集腹水后，用PBS稀釋2倍后離心（1200r/min,3min），去上清，重復(fù)洗滌過程1-2次，加入10mLPBS重懸制備成細(xì)胞懸液備用；
5
取50mL離心管加入10mL小鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液，上層加入10mL細(xì)胞懸液，離心收集沉淀（2000r/min,10min）,重復(fù)2-3次；
6
將收集的沉淀用1640培養(yǎng)基重懸，接種于T175培養(yǎng)瓶中，接種密度為4*10^5 /mL，放置培養(yǎng)箱培養(yǎng)8-12h；
7
收集細(xì)胞懸液離心（1200r/min,3min），用程序凍存液將細(xì)胞凍存，凍存密度為10^7/mL。
注意事項(xiàng)
掌握以上培養(yǎng)步驟就一定可以培養(yǎng)好細(xì)胞嗎？你還需要掌握以下這些注意事項(xiàng) ：
1
新手可以選擇處死小鼠，然后先用注射器吸出一些細(xì)胞，再剪開腹腔，用槍吸出剩下的；熟練了可以不處死小鼠，直接注射器插進(jìn)去吸，小鼠還能重復(fù)接種；
2
注意不要戳破內(nèi)臟，否則容易造成細(xì)胞交叉污染；
3
小鼠飼養(yǎng)時(shí)間控制在5天為佳。時(shí)間過長(zhǎng)，小鼠會(huì)死亡或收集的腹水中紅細(xì)胞含量過高；
4
復(fù)蘇之后會(huì)有死細(xì)胞，但不影響正常腹水的產(chǎn)生；
5
H22細(xì)胞體外培養(yǎng)增殖幾代就需要腹水培養(yǎng)一次，否則細(xì)胞狀態(tài)會(huì)急速變差，碎片增多。做實(shí)驗(yàn)需提前擴(kuò)增至所需的細(xì)胞量然后凍存起來，長(zhǎng)期培養(yǎng)需5代內(nèi)腹水培養(yǎng)一次；
6
中間每一次傳代可以先離心，PBS或生理鹽水重懸后打給下一只;
7
收集腹水紅細(xì)胞過多時(shí)，可以用紅細(xì)胞裂解液去除；
8
用分離液分離細(xì)胞時(shí)，可多次分離篩選，保證細(xì)胞的純度；
9
凍存細(xì)胞最好分離出來后培養(yǎng)8個(gè)小時(shí)左右再凍存，可以有效去除可能沒有篩出去的血紅細(xì)胞，還可以讓細(xì)胞的狀態(tài)調(diào)整至最佳；
10
細(xì)胞活力不一樣、接種細(xì)胞量不一樣，腹水長(zhǎng)出的時(shí)間就不一樣。接種是否成功可以通過觀察老鼠的狀態(tài)來確定，接了腹水的老鼠活動(dòng)力會(huì)變?nèi)酢?/p>
常見問題及解答
關(guān)于H22細(xì)胞腹水傳代，普諾賽將大家疑問較多的問題，總結(jié)如下。
01
H22腹水傳代可以用哪些小鼠？
可以用balb/c小鼠、Km小鼠等，體重在20g左右。
02
H22細(xì)胞收貨有哪些注意事項(xiàng)？
到貨后，請(qǐng)將細(xì)胞瓶豎立著靜置2~4h，然后把瓶中培養(yǎng)基上面部分培養(yǎng)基小心吸出，留底部細(xì)胞和3mL左右培養(yǎng)基在原瓶。吸出的細(xì)胞離心收集細(xì)胞沉淀，離心轉(zhuǎn)速1200轉(zhuǎn)3分鐘。
03
為什么剛到貨的H22細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞聚團(tuán)？
懸浮細(xì)胞發(fā)貨時(shí)密度不能太低，因路上運(yùn)輸，狀態(tài)不穩(wěn)定，剛到貨時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)聚團(tuán)的情況。待穩(wěn)定培養(yǎng)幾天，聚團(tuán)會(huì)消失，需要注意培養(yǎng)時(shí)少動(dòng)細(xì)胞，以免損傷細(xì)胞。
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