總抗氧化能力（T-AOC）檢測(cè)試劑盒（可見(jiàn)分光光度法）

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1467

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存，使用前預(yù)冷。

試劑一：液體35mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體20mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體5mL×1瓶，4℃避光保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1支，10mgFeSO4·7H2O，4℃保存。臨用前加入1.75ml蒸餾水，滴加1滴濃硫酸，制備20µmol/mL FeSO4標(biāo)準(zhǔn)溶液。

混合液(現(xiàn)配現(xiàn)用)：將試劑一、試劑二、試劑三按7:1:1的比例混合，使用前預(yù)溫至37℃。

產(chǎn)品說(shuō)明：

測(cè)定對(duì)象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究中常常檢測(cè)血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。

在酸性環(huán)境下，還原Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)產(chǎn)生藍(lán)色的Fe2+-TPTZ 的能力反映了總抗氧化能力。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、低溫離心機(jī)、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣品的制備：

(1) 血清、血漿、唾液或尿液樣品

血漿（制備時(shí)可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用EDTA抗凝）5000r/min離心10min，取上清待測(cè)。血清、唾液或尿液樣品直接用于測(cè)定，也可以-80℃凍存（不宜超過(guò)30 d）后再測(cè)定。

(2) 細(xì)胞或組織樣品收集約100-200萬(wàn)個(gè)細(xì)胞或者約0.1g組織，加入1.0mL預(yù)冷的提取液，勻漿或超聲以充分破碎

細(xì)胞并釋放其中的抗氧化物，4℃、10000r/min 離心5分鐘，取上清待測(cè)。需測(cè)定蛋白濃度。

二測(cè)定步驟

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：

將20μmol/mL FeSO4標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋至 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.00156μmol/mL，分別取500μL標(biāo)準(zhǔn)溶液（蒸餾水作空白）加入500μL試劑二，充分混勻，反應(yīng)10min，雙蒸水調(diào)零，1cm光徑，測(cè)定A593，計(jì)算ΔA=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白，此時(shí)Fe²⁺終濃度為 0.1、0.05、 0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.00156、0.00078μmol/mL。

2、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至593nm，蒸餾水調(diào)零。

3、操作表

三、總抗氧化能力計(jì)算

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

以Fe²⁺終濃度為橫坐標(biāo)，以△A為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程y=kx+b，將△Aˊ帶入方程求得 x(μmol/mL）。

2、計(jì)算公式：

單位定義：樣品的抗氧化能力以達(dá)到同樣吸光度變化值（△A）所需的標(biāo)準(zhǔn)液離子濃度表示。

（1）按蛋白濃度計(jì)算

總抗氧化能力（U/mg prot）=x×V反總÷（V樣×Cpr）=34×x÷ Cpr

（2）按樣品質(zhì)量計(jì)算

總抗氧化能力（U/g鮮重）=x×V反總÷（V樣÷V樣總×W）=34×x÷ W

（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

總抗氧化能力（U/10⁴cell）= x×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量）= 34×x÷細(xì)胞數(shù)量

（4）按液體體積計(jì)算

總抗氧化能力（U/mL）=x×V反總÷V樣=34×x

V樣總：加入提取液體積，1mL；V反總：反應(yīng)總體積，1.02mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.03mL；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；細(xì)胞數(shù)量：以10⁴為單位，萬(wàn)個(gè)。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑二對(duì)人體有刺激性，請(qǐng)采取適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)措施。為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴乳膠手套操作。

2. 盡量避免使用在酸性條件下呈藍(lán)色或接近藍(lán)色的樣本，否則對(duì)本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生干擾。

3. 樣品中不宜添加Tween、Triton和NP-40等去垢劑和 DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反應(yīng)的還原劑。

4. 如果樣品測(cè)定出來(lái)的吸光值在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍以外，需把樣品適當(dāng)稀釋或濃縮后再進(jìn)行測(cè)定。

5. 試劑盒2-8℃保存。