AO/EB雙熒光染色試劑盒

產(chǎn)品貨號：R23004

產(chǎn)品規(guī)格：100T

產(chǎn)品簡介：

細(xì)胞凋亡(Apoptosis)的檢測方法有形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)、DNA片段化檢測方法以及TU NEL等標(biāo)記片段化DNA方法，但從細(xì)胞凋亡概念產(chǎn)生的歷史及準(zhǔn)確性方面考慮，使用顯微鏡進(jìn)行的形態(tài)學(xué)觀察也是很重要的。細(xì)胞死亡的檢測可以通過熒光色素染色區(qū)分活細(xì)胞、死細(xì)胞，測定細(xì)胞代謝活性和形態(tài)學(xué)觀察。這些方法都是利用細(xì)胞凋亡這種情況進(jìn)行測定的，因而不一定反映實(shí)際情況， MTT法是測定線粒體中*酶的活性，反映細(xì)胞數(shù)目的變化，其結(jié)果與細(xì)胞死亡的數(shù)目未必*一致。

Acridine Orange屬于三環(huán)雜芳香燃料，可以標(biāo)記DNA、RNA，屬于異染性熒光染料，AO常用于細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA進(jìn)行檢測，AO與核酸結(jié)合方式主要有：1、插入性結(jié)合，AO嵌入核酸雙鏈的堿基對之間，這種結(jié)合方式主要為AO與DNA的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為530nm，激發(fā)后呈綠色熒光；2、靜電吸引，帶正電荷的AO與單鏈核酸的磷酸根(帶負(fù)電荷)產(chǎn)生靜電間的吸引結(jié)合，這種結(jié)合方式主要為AO與RNA的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為640nm，激發(fā)后呈紅色熒光，少量結(jié)合會呈桔黃色或桔紅色熒光。因此AO嵌合到雙鏈DNA分子中顯綠色，與DNA單鏈或RNA結(jié)合時發(fā)橙紅色熒光；Ethidiu m Bro mide嵌合到雙鏈DNA或RNA的堿基對中，無堿基特異性，發(fā)紅色熒光；AO可透過活細(xì)胞膜，EB不能通過與活細(xì)胞膜具有相同通透性的細(xì)胞膜。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 熒光顯微鏡

2. PBS

3. 細(xì)胞計(jì)數(shù)板

4. 載玻片、蓋玻片

操作步驟(僅供參考)：

1. 收集細(xì)胞，用PBS清洗細(xì)胞1次，加入適量的PBS重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至(0.2~5)×10⁶ /ml。

2. 配制AO/EB工作液：取適量的試劑(A)、試劑(B)、試劑(C)，按照試劑(A):試劑(B):試劑(C)=1:1:8的比例稀配制成 AO/EB工作液。

3. 每25~50μ l細(xì)胞懸液中加入AO/EB工作液2μ l，混合均勻，試問孵育5~15min。

4. 取潔凈載玻片，滴加上5~10μ l細(xì)胞懸液，輕輕蓋上蓋玻片。

5. 在熒光顯微鏡B域進(jìn)行觀察。

染色結(jié)果：

活細(xì)胞      綠色熒光

死細(xì)胞      橙色熒光

注意事項(xiàng)：

1. 用能通過活細(xì)胞膜與DNA結(jié)合后發(fā)藍(lán)色熒光的Hoechst 33342和只能通過死細(xì)胞與DNA結(jié)合后發(fā)紅色熒光的Propidiu m Iodide對細(xì)胞進(jìn)行雙染的方法也比較常用。

2. 如有低溫離心機(jī)進(jìn)行離心效果更佳。

3. 操作過程中應(yīng)注意減少試劑(A)、試劑(B)暴露于強(qiáng)光下的時間。

4. EB Solution有一定毒性，請小心操作。

5. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：6個月有效。4℃運(yùn)輸，4℃保存。