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【FACSCelesta實驗應(yīng)用系列】之全血NKT檢測
【實驗概述】
NKT細胞是一類新型的免疫調(diào)節(jié)細胞，在外周血中比例極低，但NKT細胞能增強免疫反應(yīng)，在抗腫瘤、抗感染、抑制自身免疫病及移植耐受中可發(fā)揮重要作用，因此人全血NKT的檢測在疾病診斷中具有重要作用，流式細胞儀是檢測NKT最佳方法之一，且NKT在全血中比例較低，全血不破紅直接檢測NKT同時也是判斷流式細胞儀檢測極低含量細胞能力的實驗方法之一。
【實驗方法】
①/ 儀器配置
| Flow cytometer | Laser |
| FACSCelesta | 488nm Blue Laser 640nm Red Laser |
②/ 配色方案及流式試劑
● 配色方案
| CD3 | CD56 | CD45 | CD235a |
| FITC | PE | PerCP-Cy5.5 | APC |
● 流式試劑
| Products Name | Catalog No. | Clone | Size | Vol.per.Test |
| BD Pharmingen™ FITC Mouse Anti-Human CD3 | 555332 | UCHT1 | 100 Test | 5ul |
| BD Pharmingen™ PE Mouse Anti-Human CD56 | 555516 | B159 | 100 Test | 5ul |
| BD Pharmingen™ PerCP-Cy™5.5 Mouse Anti-Human CD45 | 564105 | HI30 | 100 Test | 5ul |
| BD Pharmingen™ APC Mouse Anti-Human CD235a | 551336 | GA-R2 (HIR2) | 0.1 mg | 20ul/100ul Whole Blood |
| BD Pharm Lyse™ Lysing Buffer (10x ) | 555899 | 100ml |
【實驗結(jié)果】
人全血中紅細胞比例最高，可用對應(yīng)抗體CD235a將其區(qū)分，而NKT比例低，在此樣本中，NKT群與其他細胞群區(qū)分明顯，可清楚區(qū)分開，其比例約為萬分之一，需收集bai萬級別的細胞數(shù)，但因紅細胞數(shù)目眾多，以低速（14ul/min）的上樣速度上樣，檢測速度即可達到18000 events/s左右，所以此試驗同時也驗證了流式細胞儀在高速高濃度樣本的檢測中的液流穩(wěn)定性及信號丟失率。
* 本資料僅限科研用途使用
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