PriCells: 正常關(guān)節(jié)軟骨細胞的短期培養(yǎng)

來源：武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司 2021年10月14日 09:06

PriCells: 正常關(guān)節(jié)軟骨細胞的短期培養(yǎng)

實驗材料：

1. 軟骨細胞來源：動物材料可選用未成年兔的膝關(guān)節(jié)、雞胚胸軟骨。人體材料可取自引產(chǎn)胎兒或成年人手術(shù)切除的軟骨標本；

2. 清洗液：不含Ca²⁺和Mg²⁺的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素，pH7.2；

3. 消化液：0.2%膠原酶Ⅱ溶液，用PBS液配制，過濾除菌；

4. 培養(yǎng)液：RPMI1640或Ham F12、DMEM培養(yǎng)基，一般在培養(yǎng)液中加20%—30%的小牛血清；

5. 篩網(wǎng)：200目銅網(wǎng)；

實驗方法：

1. 用手術(shù)刀片從關(guān)節(jié)表面削下軟骨組織片，收集在PBS中。反復(fù)清洗除去軟骨片表面的血液以及可能誤帶的滑膜組織。新鮮軟骨呈乳白淺藍色、半透明狀，略具彈性；

2. 將軟骨片充分剪成1mm³以下的組織塊，用PBS清洗2次；

3. 按組織塊與消化液的體積比例為1：10的量加入消化液，置于37℃水浴中輕微振蕩消化5h以上，直至軟骨組織塊基本消失、溶液變渾濁為止?；虿捎梅蛛A段消化法。即每消化1h就過濾、離心1次，將分離后的軟骨細胞立即放入培養(yǎng)液中保存起來，這樣反復(fù)進行，直至所有軟骨組織塊消化*；

4. 以1500r/min離心10min。收集細胞；

5. 加入PBS清洗細胞；

6. 在細胞團中加入培養(yǎng)液制成細胞懸液，用200目銅網(wǎng)過濾，收集濾液；

7. 計數(shù)細胞，根據(jù)需要調(diào)節(jié)細胞密度；

8. 以1×10⁵—1×10⁶個/ml的密度接種。置于37℃、5%CO₂、飽和濕度的CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每2d換1次培養(yǎng)液；

9. 細胞長滿瓶壁后，即可傳代。屆時，用PBS清洗培養(yǎng)物，加入0.125%胰蛋白酶溶液，37℃下消化。鏡下觀察可見大部分細胞間基質(zhì)溶解消失。當細胞變圓時，小心傾出含酶液，加入培養(yǎng)液，吹打分散細胞；

10. 分瓶接種并培養(yǎng)；

PriCells提供：

1. 各種原代細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基；

2. 各種原代細胞培養(yǎng)特制添加劑；

3. 原代細胞分離試劑盒；

4. 原代細胞鑒定試劑盒；

5. 原代細胞總蛋白質(zhì)抽提物；

6. 原代細胞總RNA；

7. 原代細胞總DNA；

相關(guān)產(chǎn)品

凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責任。
本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權(quán)行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負版權(quán)等法律責任。
如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。

99超碰中文字幕在线观看-天天干天天日天天舔婷婷-我看操逼的好看的女人的-日本一二三四五区日韩精品