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PriCells: 正常成熟破骨細(xì)胞原代培養(yǎng)

來(lái)源:武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司   2021年10月13日 10:43  
PriCells: 正常成熟破骨細(xì)胞原代培養(yǎng)
 
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 細(xì)胞來(lái)源:新生大鼠或兔,妊娠6個(gè)月以內(nèi)的引產(chǎn)胎兒等;
2. 清洗液:不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素,pH7.2;
3. 細(xì)胞支持物:薄骨片、蓋玻片;
4. 培養(yǎng)液:199培養(yǎng)基、MEM或DMEM培養(yǎng)基均可,須補(bǔ)加15%—20%小牛血清、25mmol/L HEPES及青霉素100IU/ml、鏈霉素100μg/ml;
 
實(shí)驗(yàn)方法:
1. 薄骨片的制備:取新鮮牛股骨干的密質(zhì)部分,沿骨縱軸用骨鋸切割成大小約0.5cm×0.5CM、厚為0.1cm的小塊,再用金剛砂輪磨成厚約10—50μm(以便在相差顯微鏡下觀察)的薄骨片。使用前用超聲波清洗儀超聲洗滌3次,每次約10min。然后依次浸泡在3個(gè)盛有含青霉素(1000IU/ml)、鏈霉素(1000μg/ml)、兩性霉素B(3μg/ml)的抗生素溶液的小容器中,每次10—20min。最后可浸于盛有含抗生素的培養(yǎng)液的容器內(nèi),置4℃(短期)或-20℃(較長(zhǎng)期)冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆茫?/div>
2. 取生后3—5d的大鼠,拉頸處死后置于盛有75%酒精的容器中,消毒3—5min后,取出放入培養(yǎng)皿中;
3. 用手術(shù)剪剪開(kāi)其四肢皮膚、肌肉,取股骨和脛骨等長(zhǎng)骨,放入盛緩沖液的培養(yǎng)皿中。除去骨表面的軟組織、骨膜以及軟骨;
4. 將除去骨膜等多余組織后的長(zhǎng)骨干部分清洗后,置于盛有少量培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中。用手術(shù)刀或手術(shù)剪縱行剖開(kāi)骨干。用手術(shù)刀輕刮骨的內(nèi)表面,同時(shí)用尖吸管不斷吸取培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液,沖洗骨內(nèi)表面多次,直至骨內(nèi)表面變白為止;
5. 用吸管吸打上述含碎骨片及分離細(xì)胞的培養(yǎng)液2—5min左右,使附著于碎骨片上的破骨細(xì)胞分離脫落于培養(yǎng)液中。靜置1—2min后,待碎骨片沉降,收集細(xì)胞懸液;
6. 將細(xì)胞懸液加入到預(yù)置有薄骨片或蓋玻片的24孔培養(yǎng)板中,在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
7. 培養(yǎng)30min左右,取出薄骨片或蓋玻片用培養(yǎng)液沖洗以除去未附著的骨髓造血細(xì)胞。沖洗后,將薄骨片或蓋玻片移入另一培養(yǎng)板中繼續(xù)培養(yǎng);
 
PriCells提供:
1. 各種原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基;
2. 各種原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑;
3. 原代細(xì)胞分離試劑盒;
4. 原代細(xì)胞鑒定試劑盒;
5. 原代細(xì)胞總蛋白質(zhì)抽提物;
6. 原代細(xì)胞總RNA;
7. 原代細(xì)胞總DNA;


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