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真核表達(dá)細(xì)胞與原核表達(dá)的區(qū)別有哪些
真核表達(dá)細(xì)胞和原核變達(dá)的區(qū)別：
真核表達(dá)：常用酵母、昆蟲、動物和哺乳動物細(xì)胞。其優(yōu)點(diǎn)是根據(jù)原核生物蛋白與靶DNA的高度特異性相互作用而設(shè)計(jì)，不存在基因的非特異性激活或抑制。它可以誘導(dǎo)高達(dá)105倍的高效基因表達(dá)?？梢試?yán)格控制基因表達(dá)。
原核表達(dá)：它的優(yōu)點(diǎn)是可以在短時(shí)間內(nèi)獲得基因表達(dá)產(chǎn)物，而且成本相對較低。方法也簡單，可以表達(dá)的蛋白質(zhì)也很多。但缺點(diǎn)是表達(dá)的蛋白質(zhì)沒有經(jīng)過修飾，不一定具有天然活性，表達(dá)系統(tǒng)不能調(diào)節(jié)表達(dá)時(shí)間和表達(dá)水平。一些基因的持續(xù)表達(dá)會對宿主細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，過度表達(dá)可能導(dǎo)致非生理反應(yīng)。目前，蛋白質(zhì)往往以包涵體的形式表達(dá)，這也導(dǎo)致了產(chǎn)品純化的困難?？捎糜诳贵w制備或檢測，但應(yīng)避免功能試驗(yàn)。
真核表達(dá)細(xì)胞載體趨向于既有利于擴(kuò)增目的基因又有利于篩選陽性克隆的載體的構(gòu)建。許多有效的應(yīng)用范圍廣的強(qiáng)啟動子和增強(qiáng)子被人發(fā)現(xiàn)并應(yīng)用于載體中，大大提高了目的基因的表達(dá)量，另外一些強(qiáng)的組成型啟動子，如SV40早期啟動子+PHTLv，已應(yīng)用于大規(guī)模生產(chǎn)的細(xì)胞系中。
應(yīng)用以GS為篩選標(biāo)志的表達(dá)載體可兼有篩選和擴(kuò)增目的基因兩種功能，是目前研究的重點(diǎn)。以IRES連接的雙順反子表達(dá)載體已成為核表達(dá)載體的主體。在同一啟動子操縱下，篩選基因或報(bào)告基因與目的基因轉(zhuǎn)錄在同一mRNA上通過IRES的作用，表達(dá)出兩種蛋白，因而在理論上可認(rèn)為，通過了篩選或表達(dá)了報(bào)告基因的克隆必為陽性克隆，即表達(dá)目的基因的克隆，有報(bào)道說這種雙順反子的共表達(dá)率為90％。這就大大提高了篩選率，簡化了實(shí)驗(yàn)過程。
將強(qiáng)啟動子、增強(qiáng)子和可擴(kuò)增的篩選標(biāo)志組裝在同一載體上，構(gòu)建高效表達(dá)和篩選的表達(dá)載體并將其運(yùn)用于最合適的表達(dá)系統(tǒng)中，是當(dāng)今真核表達(dá)載體構(gòu)建研究發(fā)展方向。
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