手機版
化工儀器網手機版
化工儀器網小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
PriCells: 正常動物腸肥大細胞的培養(yǎng)
實驗材料：
1. 正常動物的腸或者手術切除標本的正常腸組織；
2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素，pH7.2；
3. TE液：Tyrode液加入2 mmol/L EDTA。Tyrode液含137 mmol/L NaCl、2.7 mmol/L KCl、0.36 mmol/L NaH2PO4、5.55 mmol/L 葡萄糖；
4. TEA液：TE液加入200mg/L氨芐青霉素、200mg/L慶大霉素和40mg/L甲硝唑；
5. TGMD液：Tyrode液加入0.1%明膠、1.23 mmol/L MgCl2和15mg/L DNA酶；
6. HA液：HEPES液補充0.25g/L不含脂肪酸的BSA。HEPES液含20 mmol/L HEPES、125 mmol/L NaCl、5 mmol/L KCl和0.5 mmol/L 葡萄糖；
7. HACM液HA液補充1 mmol/L CaCl2和1 mmol/L MgCl2；
8. 消化液a：用TE液配成，含有3g/L鏈霉蛋白酶和0.75g/L木瓜凝乳蛋白酶；
9. 消化液b：用TGMD液配成，含有1.5g/L膠原酶和0.15g/L彈性蛋白酶；
10. 1g/L 乙酰半胱氨酸溶液，用TE液配成；
11. Percoll溶液：不含酚紅的RPMI1640，添加10%FBS、50μg/L SCF、25 mmol/L HEPES、100000 IU/L青霉素和100mg/L鏈霉素。pH7.2；
12. 手術刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪，眼科鑷，止血鉗，無菌消毒手術器械；
13. 離心管（15ml、50ml）
14. 網篩：300μm不銹鋼網篩
實驗方法：
1. 取正常動物腸組織10—40g，用4℃的TEA液中，用眼科剪分離粘膜下層與肌層。將粘膜層和粘膜層切成1cm2的小塊，放入乙酰半胱氨酸溶液中，室溫下浸泡10min，除去粘液。將組織塊放入含5mmol/L EDTA的TEA液中，然后在培養(yǎng)箱內放置15min，除去上皮細胞；
2. 用TE液充分沖洗組織塊，然后將組織塊剪碎，放入消化液a中，室溫下消化30min。用孔徑為300μm不銹鋼篩網濾去已脫落下來的細胞。用TE液清洗，然后用消化液a將組織塊重復消化1次；
3. 將組織塊用TGMD液清洗后，放入消化液b中，在30℃條件下消化30min。用孔徑為300μm不銹鋼篩網濾出組織塊，收集濾液，在4℃條件下離心（400g，10min）。吸去上清液，用HA液混懸沉淀細胞，在4℃條件下保存；
4. 按操作步驟3重新操作1次，得到細胞懸液；
5. 將操作步驟3和4收集的細胞懸液混合，用孔徑為100μm不銹鋼篩網過濾，收集濾液，在4℃條件下離心（400g，10min）。用HACM液混懸細胞，調整細胞密度至0.5×106—2×106個/ml；
6. 在50ml離心管中加入濃度為1.037g/ml的Percoll溶液20ml，將細胞懸液加于Percoll溶液表面上，然后在20℃條件下離心（400g，10min）。用HA液混懸沉淀細胞，在4℃條件下離心（400g，10min），然后重復離心1次；
7. 用培養(yǎng)液混懸沉淀細胞，調整細胞密度至0.5×106—2×106個/ml，放37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24h后換液，以后每周換液1次；
PriCells提供：
1. 各種原代細胞特制基礎培養(yǎng)基；
2. 各種原代細胞培養(yǎng)特制添加劑；
3. 原代細胞分離試劑盒；
4. 原代細胞鑒定試劑盒；
5. 各種原代細胞DNA；
6. 各種原代細胞RNA；
7. 各種原代細胞蛋白質；
免責聲明
- 凡本網注明“來源：化工儀器網”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品，未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的，應在授權范圍內使用，并注明“來源：化工儀器網”。違反上述聲明者，本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源（非化工儀器網）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時，必須保留本網注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內與本網聯系，否則視為放棄相關權利。
采購中心