PriCells: 正常大兔主動脈內(nèi)皮細胞的培養(yǎng)

實驗材料：

1. 正常大兔主動脈；

2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素，pH7.2；

3. 培養(yǎng)用液：M199培養(yǎng)液（含20%小牛血清）；0.125%胰蛋白酶-0.01%EDTA（1:1，V：V）混合消化液；D-Hanks液、100IU/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素；

4. 培養(yǎng)器具：培養(yǎng)瓶或皿、白內(nèi)障、眼科剪、鑷子等；

培養(yǎng)方法：

1． 將動物主動脈取出后，用絲線結(jié)扎血管一端，然后用探針頂住該端，將整條血管翻轉(zhuǎn)，使內(nèi)膜翻在外面。將另一端翻折入腔內(nèi)0.5cm并用絲線扎緊，以防外膜外露及避免酶液進入外膜腔內(nèi)；

2． 用D-Hanks液清洗干凈外翻的內(nèi)膜面，將血管浸泡在含0.1%膠原酶溶液的小瓶內(nèi)。蓋上瓶蓋，在37℃水浴中輕輕搖蕩消化，使內(nèi)皮細胞離散下來。消化15—20min后，見酶液稍有渾濁，即加入等量的含20%小牛血清的M199培養(yǎng)液，以終止酶的作用。離心（1500r/min,5min）后，棄上清液，用20%小牛血清M199培養(yǎng)液重新懸浮細胞；

3． 接種到培養(yǎng)器皿內(nèi)，入37℃、含5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細胞長滿瓶皿的生長表面即可傳代；

4． PriCells-原代內(nèi)皮細胞細胞特制基礎培養(yǎng)基；

5． PriCells-原代內(nèi)皮細胞細胞培養(yǎng)特制添加劑；

6． PriCells-原代細胞分離試劑盒；

7． PriCells-原代細胞鑒定試劑盒；