PriCells: 正常人支氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)

來源：武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司 2021年09月28日 09:16

PriCells: 正常人支氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)材料：

1. 手術(shù)切除的含支氣管的正常肺組織

2. 胰蛋白酶/EDTA液：0.05%胰蛋白酶，0.5mmol/L EDTA

3. 6孔培養(yǎng)板：用多聚賴氨酸包被

4. 不含Ca²⁺和Mg²⁺的1×PBS（pH=7.2），添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素和200000U/L慶大霉素，pH7.4

5. 手術(shù)刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪，眼科鑷

6. 離心管（15ml、50ml）

實(shí)驗(yàn)方法：

1. 將分離的兩片肺葉組織用含雙抗的1×PBS（pH=7.2）反復(fù)清洗幾次；

2. 小心的用眼科剪將肺葉中的白色支氣管組織剪下；

3. 再用含雙抗的1×PBS（pH=7.2）反復(fù)沖洗若干次；

4. 將取下的支氣管組織剪成1mm³左右大小的組織塊；

5. 用含雙抗的1×PBS（pH=7.2）反復(fù)清洗，直至清洗液清亮為止；

6. 將組織塊轉(zhuǎn)入15ml離心管中，200rpm/min離心2min ，離心后傾去1×PBS（pH=7.2）；

7. 加入組織塊4-5倍體積的胰酶，37℃水浴中消化30min，不時(shí)震蕩；

8. 消化完成后，200rpm/min離心2min，小心傾去消化液，再加入組織塊4-5倍體積膠原酶Ⅱ，37℃水浴中消化1h，不時(shí)震蕩；

9. 消化完成后震蕩離心管3次，之后靜置5min，待較大的組織塊沉降至管底后，小心吸出上層懸液（如吸出的懸液中絮狀或塊狀的組織較多，可考慮過200目網(wǎng)篩去除），轉(zhuǎn)入另一離心管中；

10. 1000rpm/min離心5min，傾去上層液體，加入培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，轉(zhuǎn)入6孔板中，置于37℃、5%CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

PriCells提供：

1. 各種原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基；

2. 各種原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑；

3. 原代細(xì)胞分離試劑盒；

4. 原代細(xì)胞鑒定試劑盒；

5. 各種原代細(xì)胞DNA；

6. 各種原代細(xì)胞RNA；

7. 各種原代細(xì)胞蛋白質(zhì)；

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