凝血酶原時(shí)間（PT）檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

  凝血酶原時(shí)間（PT）檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)組織因子替代反應(yīng)物，與血漿樣品混合后，加入鈣離子啟動(dòng)凝血反應(yīng)，產(chǎn)生凝塊，通過(guò)分光光度儀檢測(cè)，來(lái)測(cè)定樣品中凝塊形成時(shí)間的*而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種動(dòng)物和人體血漿樣品凝血系統(tǒng)的檢測(cè)，以及凝血因子和抑制劑的的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

凝血酶原時(shí)間（thromboplastin time；PT）是指血漿在組織凝血活酶（人腦、兔腦、胎盤(pán)及肺組織等制品的浸出液）和鈣離子等的參與下，使凝血酶原變?yōu)槟?，后者使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白，形成血漿纖維蛋白凝塊（fibrin clot）所需的時(shí)間長(zhǎng)度。其反映和檢測(cè)血液系統(tǒng)外源性（extrinsic）或稱(chēng)常見(jiàn)（common）凝血通路或機(jī)制的生理或病理狀況。外源性凝血通路或機(jī)制由凝血因子2、7、5、10、1等構(gòu)成。正常凝血酶原時(shí)間通常為11至15秒。凝血酶原時(shí)間用于篩選出血傾向的病人，即外源性凝血系統(tǒng)異常的病人；定量檢測(cè)凝血因子1、2、5、7、10、凝血酶原（prothrombin）、纖維蛋白原（fibrinogen）等差異和缺陷；檢測(cè)血液病理性凝血抑制劑，例如狼瘡抗凝物（lupus anticoagulant；LA）；監(jiān)測(cè)華法林（Warfarin）抗凝血療法和凝血因子替代療法。維生素K缺乏、肝病、低（無(wú)）纖維蛋白原血癥 、遺傳性無(wú)纖維蛋白原血癥（congenital afibrinogenemia）、凝血因子5缺陷、阻塞性黃疸、淀粉樣紫癜（amyloid purpura）、肝素、狼瘡抗凝物等導(dǎo)致凝血酶原時(shí)間延長(zhǎng)；而口服避孕藥、高凝狀態(tài)和血栓性疾病等則引起凝血酶原時(shí)間縮短。其檢測(cè)方法在于使用枸櫞酸抗凝后的血漿和組織因子（來(lái)自于人胎盤(pán)促凝血酶原激酶（human placental thromboplastin）等，混合在一起，加熱孵育后加入鈣離子后啟動(dòng)凝血反應(yīng)。

產(chǎn)品內(nèi)容

  抗凝液（Reagent A）          毫升

  反應(yīng)液（Reagent B）            管

  稀釋液（Reagent C）           毫升

  標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）            微升（另購(gòu)）

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)                1份

保存方式

保存  標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）在-20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；  反應(yīng)液（Reagent B）一旦啟用，保存在-20℃冰箱里；有效保證3月 

用戶(hù)自備

2毫升離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于樣品反應(yīng)的容器

微型臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作

培養(yǎng)箱或恒溫水槽：用于反應(yīng)物孵育

計(jì)時(shí)器：用于反應(yīng)計(jì)時(shí)

比色皿：用于樣品凝血儀測(cè)定的容器

凝血儀：用于樣品凝塊形成分析

實(shí)驗(yàn)步驟

一、 血漿制備

1． 準(zhǔn)備好2毫升離心管（注意：1小時(shí)內(nèi)完成后續(xù)操作）

2． 加入xx微升  抗凝液（Reagent A） 

3． 抽取xx毫升血液到含  抗凝液（Reagent A）的離心管

4． 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為3000g 

5． 小心移取上層黃色液體到新的2毫升離心管――此為血漿成分（注意：避免觸碰白色液體層）

6． 即刻置于冰槽里備用（注意：2小時(shí)內(nèi)使用）

二、 測(cè)定準(zhǔn)備

1． 準(zhǔn)備好上述制備的血漿樣品

2． 設(shè)定好凝血儀并預(yù)熱

3． 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，移出xx毫升  稀釋液（Reagent C）到  反應(yīng)液（Reagent B）管里，混勻后，標(biāo)記為  反應(yīng)工作液，然后移出200微升到新的1.5毫升離心管，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱里孵育30分鐘，其余的即刻放進(jìn)-20℃保存?zhèn)溆?/span>

三、 凝血測(cè)定（手工操作）

1． 準(zhǔn)備好1個(gè)1.5毫升離心管

2． 加入100微升上述制備的待測(cè)樣品，混勻

3． 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里孵育3分鐘（注意：不宜超過(guò)5分鐘）

4． 即刻加入上述孵育的200微升  反應(yīng)工作液；同時(shí)開(kāi)啟計(jì)時(shí)器進(jìn)行計(jì)時(shí)（注意：以秒計(jì)時(shí)）

5． 傾斜離心管觀察凝塊形成，直至液體凝固；同時(shí)關(guān)閉計(jì)時(shí)器結(jié)束計(jì)時(shí)

6． 正常參考范圍：

手工操作：11至15秒

凝血儀操作：10至13秒

7． 其它參數(shù)計(jì)算公式：

注意事項(xiàng)

1． 本產(chǎn)品為20次操作，包括標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照測(cè)定

2． 操作時(shí)，須戴手套

3． 血液采集，避免使用肝素、EDTA抗凝管

4． 樣品避免溶血，采血避免損傷組織

5． 溶血、脂血、腸胃外喂養(yǎng)（parenteral feeding）樣品或血漿中含有肝素、纖維蛋白（fibronogen）、狼瘡抗凝物（lupus anticoagulant；LA）、水蛭素（Hirudin）等則干擾檢測(cè)

6． 血漿樣品避免反復(fù)凍融：4℃環(huán)境維持4小時(shí)；－20℃維持2月；－80℃維持6月

7．   標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照血漿

8． 建議用戶(hù)使用正常對(duì)照樣品，建立自己的正常參考值范圍

9． 用戶(hù)可以使用各種自動(dòng)和半自動(dòng)凝血儀：例如Sysmex CA 7000等進(jìn)行檢測(cè)，按照儀器操作手冊(cè)操作

10． 用戶(hù)可以使用660nm波長(zhǎng)的光度儀進(jìn)行檢測(cè)

11． 本公司提供系列血液凝集檢測(cè)試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感