外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導法和病毒介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質(zhì)粒進入；磷酸鈣法和脂質(zhì)體法是利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞；病毒法是利用包裝了外源基因的病毒感染細胞的方法使得其進入細胞。但是由于電擊法和磷酸鈣法的實驗條件控制較嚴、難度較大；病毒法的前期準備較復雜、而且可能對于細胞有較大影響；所以現(xiàn)在對于很多普通細胞系，一般的瞬時轉(zhuǎn)染方法多采用脂質(zhì)體法。

利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法最重要的就是防止其毒性，因此脂質(zhì)體與質(zhì)粒的比例，細胞密度以及轉(zhuǎn)染的時間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要問題，通過實驗摸索的合適轉(zhuǎn)染條件對于效率的提高有巨大的作用。

1、細胞傳代
1）棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用1ml的PBS溶液洗滌兩次。
2）用移液槍加入1ml胰酶，消化1min（37℃，5% CO2）。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細胞*從壁上脫落下來為止。
3）加入1ml的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。
4）用移液槍多次吹吸，使細胞*分散開。
5）將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm離心5min。
6）用培養(yǎng)液重懸細胞，細胞計數(shù)后選擇0.8 x 106個細胞加入一個35mm培養(yǎng)皿。
7）將合適體積*培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。
8）將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。

2、細胞轉(zhuǎn)染
1）轉(zhuǎn)染試劑的準備
A、將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10s，溶解脂狀物。
B、震蕩后將試劑放在-20℃保存，使用前還需震蕩。
2）選擇合適的混合比例（1:1-1:2/脂質(zhì)體體積ul：DNA質(zhì)量ug）來轉(zhuǎn)染細胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。
3）將混合液在室溫放置10-15min。
4）吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。
5）加入混合液，將細胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時。
6）到時間后，根據(jù)細胞種類決定是否移除混合液，之后加入*培養(yǎng)繼續(xù)培養(yǎng)24-48h。

3、第二次細胞傳代
1）在轉(zhuǎn)染后24h，觀察實驗結(jié)果并記錄綠色熒光蛋白表達情況。
2）再次進行細胞傳代，按照免疫染色合適的密度0.8 x 105個細胞/35mm培養(yǎng)皿將細胞重新分入培養(yǎng)皿中。
3）在正常條件下培養(yǎng)24h后，按照染色要求條件固定。