大鼠補體片斷3a（C3a）ELISA檢測試劑盒基本操作流程：

前期準備工作：

        實驗前樣本和試劑盒室溫平行 1 小時，如果樣本是凍存樣本，應(yīng)提前拿到 2-8 攝氏度進行解凍（不建議直接室溫解凍）

        準備好實驗所需耗材，蒸餾水（去離子水）。

操作流程描敘：

         1、將要進行實驗的版孔進行設(shè)定好，標準品 5 個點，每個點設(shè)定平行，需要用到 10 個孔，空白只需 1 個孔。剩下孔可以做為樣本孔

         2、 稀釋標準，準備好 5 個 EP 管，然后在每個 EP 管中加入 150 微升標準稀釋液，編上編碼，分別為 1，2，3，4,5，在 1 號管中加入 150 標準品，用槍頭反復(fù)吹打 10 次左右（注意控制幅度不要過大容易產(chǎn)生氣泡）如果有渦旋儀可以在渦旋儀上渦旋 5 秒左右，然后換槍頭，在 1 號管中取 150 微升加入到 2 號管，后面過程一次類推。最后稀釋完，前面 4 個管中每管液體在 150 微升，5 號管為 300 微升。濃度是從大到小。

         3、 標準、樣本、空白加樣：標準是每個濃度點 2 個孔（做平行），每孔加入 50 微升，加樣過程中注意換槍頭，樣本孔中每孔加入 50 微升，加樣過程中注意換槍頭，空白孔加入 50 微升標準稀釋液或者樣本稀釋液。特別要說明的是，標準加樣和樣本加樣盡量控制在 15 分鐘內(nèi)加完，如果時間拖的太長，會導(dǎo)致前面孔先反應(yīng)后面孔才開始反應(yīng)，這樣數(shù)值偏差過大。加完樣后蓋上封板膜，至 37 攝氏度孵育 30 分鐘.

        4、洗版，在孵育過程中可以將洗滌液配好，20 ml30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水或者去離子水定容到 600 ml 即可。每孔加入 250-300 微升的洗滌液（不要漫過版孔），（如果有震蕩儀的話，可以講板子放入震蕩儀上 5 秒左右，然后靜止三十秒，沒有請忽略次過程）將板子在桌子上晃動 5 秒左右，然后靜置 30 秒，甩干，拍板。說明：甩干過程盡量要快，1 秒內(nèi)就可以完成，不要慢慢傾斜倒掉液體，直接翻板甩掉液體即可。拍板過程需要在桌子上墊一層吸水紙或者濾紙，版孔朝下拍幾下，拍干區(qū)別主要看吸水紙和濾紙上沒有明顯的水漬為完成。

         5、每孔加入 50 微升的酶標試劑，此處在空白孔中不需要加（空白孔為空），孵育 30 分鐘。

         6、  洗版同步驟 4

         7、顯色，先每孔中加入 50 微升的顯色 A 液，然后每孔中加入 50  微升顯色  B  液。避光 37 攝氏度顯色 15 分鐘

         8、終止，每孔加入 50 微升的終止液，注意，加完終止液必須在 15  分鐘內(nèi)讀數(shù)，超過時間讀數(shù)無效。在規(guī)定時間內(nèi)讀數(shù)都是有效的。

         9、至此，整個實驗結(jié)束。

需要額外提醒的是：

       在做完整個實驗過儀器之前，儀器最好預(yù)熱半小時，這個計算好時間，也可以直接將儀器一直開著，直到整個實驗結(jié)束。

       在加液過程中不要使槍頭觸及到板子底部，一般槍頭都懸空，可以將槍頭靠在孔邊緣，但槍頭尖懸空，如果槍頭上殘留液體看整體多少量，不要吹打下去。特別忌諱在版孔內(nèi)壁流向版孔。整個加液過程不要產(chǎn)生氣泡。（洗滌液除外）