M15化學(xué)感受態(tài)細胞操作方法看似簡單,細節(jié)很重要

來源：賽爾瑞成（北京）生命科學(xué)技術(shù)有限公司 2020年11月24日 10:35

　　M15化學(xué)感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌M15菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。它能表達lac阻遏蛋白，抑制T5強啟動子的表達。同時，pREP4還

　　賦予宿主菌株卡那霉素抗性。pREP4是從pACYC改造而來的，含有p15A復(fù)制子。它能夠與所有帶ColE1復(fù)制起點的質(zhì)粒共存。

　　主要特點

　　使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達108，-80℃保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

　　recA1和endA1突變阻止對克隆DNA的修飾或?qū)λ拗骶旧獶NA的重組，提高純化

　　質(zhì)粒的產(chǎn)量和質(zhì)量。

　　M15化學(xué)感受態(tài)細胞操作方法

　　1、取100μl冰上融化的M15感受態(tài)細胞，加入目的DNA并用指尖輕輕敲打管底混勻(避免用槍吸打)，冰上靜置25分鐘。

　　2、42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

　　3、向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

　　4、5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

　　5、將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

　　M15感受態(tài)細胞感受態(tài)細胞使用注意事項

　　1、感受態(tài)細胞一般在冰上融化。

　　2、混入目的DNA時應(yīng)輕柔操作。

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