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說說人表皮永生化細(xì)胞HACAT的培養(yǎng)步驟

來源:鏡像綺點(diǎn)(上海)細(xì)胞技術(shù)有限公司   2023年06月16日 13:51  
  說說人表皮永生化細(xì)胞HACAT的培養(yǎng)步驟。
  1、復(fù)蘇細(xì)胞:在37℃水浴中快速搖動(dòng)裝有1mL細(xì)胞懸液的冷凍管融化,加入5mL培養(yǎng)基并充分混合。在1000RPM下離心5分鐘,棄去上清液,加入4-6mL*培養(yǎng)基并充分吹掃。然后將所有細(xì)胞懸浮液添加到培養(yǎng)瓶中,并培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸浮液添加到6cm皿中)并培養(yǎng)過夜。第二天換培養(yǎng)基,檢查細(xì)胞密度。
  2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%,則可以傳代培養(yǎng)。
 

人表皮永生化細(xì)胞HACAT

  對(duì)于貼壁人表皮永生化細(xì)胞HACAT ,傳代可參考以下方法:
  (1)棄去培養(yǎng)上清液,并用不含鈣和鎂離子的PBS沖洗細(xì)胞1-2次。
 ?。?)向培養(yǎng)瓶中加入1-2ml消化液(0.25%胰蛋白酶-0.53mMEDTA),將其置于37℃的培養(yǎng)箱中1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞的消化情況,如果大部分細(xì)胞旋轉(zhuǎn)并掉落后,迅速將其帶回手術(shù)臺(tái),輕敲培養(yǎng)瓶幾次,并加入5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。
  (3)輕輕吹干細(xì)胞,然后將其*吸出。以1000RPM離心8-10分鐘,棄去上清液,加入1-2mL培養(yǎng)基并充分吹掃。
 ?。?)加入5-6ml/瓶培養(yǎng)液,然后將細(xì)胞懸液分成新的培養(yǎng)皿或瓶,其中裝有5-6ml培養(yǎng)液的比例為1:2至1:5。
  對(duì)于懸浮人表皮永生化細(xì)胞HACAT,傳代可參考以下方法:
 ?。?)收集細(xì)胞,以1000RPM離心8-10分鐘,棄去上清液,并加入1-2mL培養(yǎng)基吹凈,然后將細(xì)胞懸液分成新的培養(yǎng)皿或瓶,其中含有8ml培養(yǎng)基,比例為1:2至1:5。
 ?。?)可以選擇一半的介質(zhì)更換方法。丟棄一半培養(yǎng)基后,懸浮剩余的細(xì)胞,然后將細(xì)胞懸浮液分成新的含有8ml培養(yǎng)基的細(xì)胞懸浮液,比例為1:2至1:3。在盤子或瓶子里。
  3、細(xì)胞凍存:當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)良好時(shí),可以將其冷凍保存。將貼壁細(xì)胞冷凍保存后,棄去培養(yǎng)基并加入少量胰蛋白酶。細(xì)胞變成圓形并脫落后,通過離心收集它們。

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