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重組蛋白真核表達(dá)與原核表達(dá)如何選擇
重組蛋白真核表達(dá)包括酵母表達(dá)系統(tǒng)、桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)、腺病毒表達(dá)系統(tǒng)等。一般可以正確折疊，包含各種修改。但是價(jià)格高，周期長(zhǎng)。
重組蛋白真核表達(dá)與原核表達(dá)如何選擇
真核表達(dá)：常用酵母、昆蟲(chóng)、動(dòng)物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞。其優(yōu)點(diǎn)是根據(jù)原核生物蛋白與靶DNA的高度特異性相互作用而設(shè)計(jì)，不存在基因的非特異性激活或抑制。它可以誘導(dǎo)高達(dá)105倍的高效基因表達(dá)?？梢試?yán)格控制基因表達(dá)。
原核表達(dá)：它的優(yōu)點(diǎn)是可以在短時(shí)間內(nèi)獲得基因表達(dá)產(chǎn)物，而且成本相對(duì)較低。方法也簡(jiǎn)單，可以表達(dá)的蛋白質(zhì)也很多。但缺點(diǎn)是表達(dá)的蛋白質(zhì)沒(méi)有經(jīng)過(guò)修飾，不一定具有天然活性，表達(dá)系統(tǒng)不能調(diào)節(jié)表達(dá)時(shí)間和表達(dá)水平。一些基因的持續(xù)表達(dá)會(huì)對(duì)宿主細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，過(guò)度表達(dá)可能導(dǎo)致非生理反應(yīng)。目前，蛋白質(zhì)往往以包涵體的形式表達(dá)，這也導(dǎo)致了產(chǎn)品純化的困難?？捎糜诳贵w制備或檢測(cè)，但應(yīng)避免功能試驗(yàn)。
目前的表達(dá)系統(tǒng)各有利弊，但一般理想的表達(dá)系統(tǒng)滿足以下幾點(diǎn)：一是特異性，不受其他內(nèi)源性因素影響，只能通過(guò)外源性無(wú)毒物激活。二是不干擾，不干擾細(xì)胞通路。以及誘導(dǎo)劑的誘導(dǎo)性、生物利用度、可塑性和劑量依賴性。
因此，在選擇表達(dá)系統(tǒng)時(shí)，必須充分考慮各種因素，如蛋白質(zhì)性質(zhì)、實(shí)驗(yàn)條件、生產(chǎn)成本、表達(dá)水平和安全性。權(quán)衡利弊后，選擇相應(yīng)的表達(dá)系統(tǒng)。
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