利用可見光等測定物質(zhì)的吸收光譜,利用此光譜對物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析和物質(zhì)結(jié)構(gòu)分析的方法,稱為分光光度法,使用的儀器是分光光度計??梢姺止夤舛扔嬍且环N結(jié)構(gòu)簡潔、使用方便的單光束分光光度計,是生物化學(xué)研究中*的基本手段之一。可見分光光度計的工作原理是:
當(dāng)一束單色光照射待測物質(zhì)的溶液時,當(dāng)某一定頻率(或波長)的可見光所具有的能量(hf)恰好與待測物質(zhì)分子中的價電子的能級差相適應(yīng)(即ΔE=E2-E1=hf)時,待測物將對該頻率(波長)的可見光產(chǎn)生選擇性的吸收。用可見分光光度計可以測量和記錄其吸收程度(吸光度)。由于在一定條件下,吸光度A與待測物質(zhì)的濃度C及吸收地長度l的乘積成正比,即A= KCL,所以,在測得吸光度 A后,可采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法、比較法以及標(biāo)準(zhǔn)加入法等方法進(jìn)行定量分析。
當(dāng)一束單色光照射待測物質(zhì)的溶液時,當(dāng)某一定頻率(或波長)的可見光所具有的能量(hf)恰好與待測物質(zhì)分子中的價電子的能級差相適應(yīng)(即ΔE=E2-E1=hf)時,待測物將對該頻率(波長)的可見光產(chǎn)生選擇性的吸收。用可見分光光度計可以測量和記錄其吸收程度(吸光度)。由于在一定條件下,吸光度A與待測物質(zhì)的濃度C及吸收地長度l的乘積成正比,即A= KCL,所以,在測得吸光度 A后,可采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法、比較法以及標(biāo)準(zhǔn)加入法等方法進(jìn)行定量分析。
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