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如何看待C18的液相色譜固定相?

來源:上海屹利科學(xué)儀器有限公司   2020年03月06日 14:04  

    早在20世紀(jì)初,植物學(xué)家Mikhail Tsvet為了分離植物中天然色素,設(shè)計了早的色譜實(shí)驗(yàn):碳酸鈣被置于玻璃管中,石油醚被選作流動相,不同的色素按疏水性由強(qiáng)至弱的順序被洗脫。經(jīng)過數(shù)十年的發(fā)展,5um~10um大小的球形硅膠顆粒,也就是現(xiàn)在被廣泛應(yīng)用于HPLC系統(tǒng)的商品化色譜柱才開始大規(guī)模生產(chǎn)。與Tsvet實(shí)驗(yàn)類似的色譜模式,被稱為正相色譜(normal phase chromatography)。相對應(yīng)的,組分的洗脫順序相反,疏水性強(qiáng)的化合物更晚被洗脫的情況,則被稱為反相色譜(reversed-phase chromatography)。反相色譜已經(jīng)成為了現(xiàn)今應(yīng)用廣泛的色譜模式。為了在反相色譜體系中達(dá)到理想的分離效果,我們對固定相、流動相、溫度等等參數(shù)一一進(jìn)行優(yōu)化。接下來我們將討論一個簡單情況:各組分按疏水性差異被依次洗脫。

        今天的主角:C18。C18現(xiàn)今的“江湖地位”可以說是天時、地利、人和三者相互結(jié)合的結(jié)果: 

   C18分子本身與樣品組分,進(jìn)行簡單的疏水相互作用,不受二級作用(例如,氫鍵)的干擾。當(dāng)目標(biāo)組分被流動相帶入硅膠孔隙中,依據(jù)疏水性的差異,不同組分在固定相上“停留”的時間也不同。

   C18與硅膠也堪稱天作之合。通常情況下,硅膠基質(zhì)色譜填料,通過硅烷化試劑與硅膠表面的硅羥基進(jìn)行縮合反應(yīng),以達(dá)成化學(xué)鍵合。而各類單功能團(tuán)硅烷之中,十八烷基二甲基氯硅烷的鍵合反應(yīng)相對更容易控制。C18在自然狀態(tài)下非常穩(wěn)定,小于18個碳原子的直鏈烷烴在物理性質(zhì)上傾向于液體,不易控制。

      C18提供的疏水選擇性“剛剛好”。既不會由于C鏈過長導(dǎo)致容易吸附樣品(主要還是針對小分子來說,大分子仍舊容易在C18吸附),也不會因?yàn)槭杷圆蛔愣鴮?dǎo)致無法分離各組分。

     由此可見,在使用C18色譜柱時,組分在流動相中的狀態(tài)應(yīng)當(dāng)成為我們時刻關(guān)注的一個重要點(diǎn)。

 

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