PCR基因擴增儀對樣品的收集和擴增環(huán)節(jié)操作要求

來源：上海培清科技有限公司 2019年12月05日 10:09

　　PCR基因擴增儀是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法，由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應組成一個周期，循環(huán)進行，使目的DNA得以迅速擴增，具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。

　　PCR基因擴增儀檢測微量感染因子時，操作人員容易因為污染而導致各種問題。SLD中檢實驗室技術(shù)根據(jù)多年行業(yè)經(jīng)驗，給出的建議是：進行PCR操作時，操作人員一定要嚴格遵守一些操作規(guī)程，大程度地降低可能出現(xiàn)的PCR污染事故的發(fā)生。

　　盡管PCR擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應導致的，但樣品間的交叉污染也是常見原因之一。因此，不僅要在進行擴增反應時要謹慎對待，在樣品的收集、抽提和擴增的所有環(huán)節(jié)都應謹慎操作，一般需做到以下幾點：

　　1、戴一次性手套，若不小心濺上反應液，應立即更換手套;

　　2、避免反應液飛濺，若不小心濺到手套或桌面上，應立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;

　　3、使用一次性吸頭，嚴禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用，吸頭不要長時間暴露于空氣中，避免空氣中氣溶膠的污染;

　　4、操作多份樣品時，制備反應混合液，先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好，然后再分裝，這樣既可以減少操作次數(shù)，避免污染，又可以增加反應的精確度；

　　5、后加入反應模板，加入后蓋緊反應管;

　　6、操作時設(shè)立空白對照和陰陽性對照，既可驗證PCR反應的可靠性，又可

　　以協(xié)助判斷擴增系統(tǒng)的可信性;

　　7、由于實際操作時加樣器很容易受產(chǎn)物氣溶膠或標本DNA的污染，所以操作者應該使用高壓處理過的或可替換的加樣器。假如沒有這種特殊的加樣器，至少在PCR操作過程中加樣器應該，嚴禁交叉使用，尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個相鄰區(qū)域使用;

　　8、重復實驗，驗證結(jié)果，慎下結(jié)論。

　　由于PCR實驗操作非常專業(yè)，在設(shè)計PCR基因擴增實驗室時設(shè)計師也要充分考慮上述技術(shù)要求，避免PCR實驗室在后續(xù)使用時出現(xiàn)返工、返修問題。

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