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試驗采用酶消化及機械法相結合的方法培養(yǎng)奶牛子宮內膜上皮原代細胞及傳代細胞。酶消化法采用0.1%鏈蛋白酶于4℃消化16~20h,機械法采用手術刀刮取子宮角內膜。獲得原代分離的細胞后,采用胰蛋白酶消化法進行細胞的傳代培養(yǎng)。試驗應用角蛋白抗體對細胞進行免疫細胞化學鑒定,并對第3代奶牛子宮內膜上皮細胞用MTT法繪制增殖曲線。結果顯示,細胞在相差顯微鏡下呈明顯的上皮樣細胞形態(tài),細胞傳代到第8代時,仍能保持與原代細胞相似的細胞形態(tài)特征及生長狀態(tài)。同時細胞角蛋白染色陽性細胞占80%以上。試驗結果表明,應用酶消化和機械法可成功分離并培養(yǎng)數量、活力和純度均較高的子宮內膜細胞,可操作性強,可在具備基本細胞培養(yǎng)條件的實驗室應用推廣。
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