HPLC分析中，在se譜柱正常，樣品靈敏度足夠，分析方法合適，se譜峰在出峰時(shí)間較短的條件下（不包括梯度），峰型應(yīng)對(duì)稱而尖銳。但是，在對(duì)樣品了解程度不夠，方法不妥，樣品處理方法及進(jìn)樣方式不合理下，會(huì)出現(xiàn)各種意想不到的問(wèn)題，而對(duì)se譜峰難以作出合理的解釋，尤其對(duì)于新手更是如此。下面根據(jù)本人幾年工作的體會(huì)，提出一些看法，向同仁指教。    se譜雙峰指的是明是一種物質(zhì)，但在se譜圖中出現(xiàn)雙峰，而表明含二種物質(zhì)。我將這種情況分為四種原因。    

1 se譜柱     如果你分析樣品時(shí)發(fā)現(xiàn)每個(gè)se譜峰都雙峰出現(xiàn)（出峰越快，雙峰的可能性會(huì)減少），尤其采用單一純物質(zhì)時(shí)，可以肯定se譜柱出問(wèn)題－柱頭受損或柱頭固定相變臟或流失。如果進(jìn)樣量少，原來(lái)se譜柱正常，色譜峰的形狀多為一da峰帶一小峰，不一定拖尾，這一般應(yīng)是柱頭受堵，將色譜柱反過(guò)來(lái)接，用流動(dòng)相沖洗或酸洗或其它溶劑，將堵在柱頭的殘留物沖掉，再反過(guò)來(lái)，一般情況下就行了。當(dāng)然不反沖，正沖有時(shí)也會(huì)正常的。如果峰拖尾，雙峰強(qiáng)弱相差不da，柱頭固定相變臟或流失可能性更da，這是可以將進(jìn)樣那頭擰開(kāi)，將微孔濾片超聲，柱頭刮去一部分填料，重新填上新填料擰緊，不過(guò)這種活，需要一定技術(shù)，同時(shí)不能老干那種事，否則用不了幾次，色譜柱就會(huì)應(yīng)柱效很低而報(bào)廢。    

2 溶劑極性及進(jìn)樣量     許多HPLC分析者對(duì)此可能不以為然，一般的HPLC的書籍和文獻(xiàn)都不會(huì)提到這方面的內(nèi)容，而這確是雙峰產(chǎn)生的一個(gè)很重要的原因。目前HPLC分析多為反相se譜，流動(dòng)相多為甲醇、乙腈、水，加各種添加劑以改善分離性能。樣品一般用與流動(dòng)相相溶的溶劑溶解。溶解方法是用流動(dòng)相溶解，但是很多情況是不一致的。當(dāng)用溶劑極性強(qiáng)度da的試劑，如純甲醇、純乙腈，純乙醇，而分析體系中以水為主，樣品進(jìn)樣量da，如定量管為20ul，此條件下*可以肯定，單一的純物質(zhì)出雙峰，第二峰比第—峰小（每次都不太一樣），且拖尾，保留時(shí)間會(huì)提前（相對(duì)進(jìn)樣量少而言），將進(jìn)樣量減少一半以上，峰型將變?yōu)檎?。這是樣品的溶劑與流動(dòng)相極性相差太da，而流動(dòng)相來(lái)不及將其稀釋達(dá)到平衡造成的。上面提到進(jìn)樣量造成雙峰的一個(gè)原因，另一個(gè)原因是，進(jìn)樣量不一定大，但量很大，se譜圖上的雙峰緊靠在一起，基本上齊高，不拖尾（如果出峰很快，也可能是se譜柱問(wèn)題）。將樣品稀釋再進(jìn)樣就可以了，這是由于進(jìn)樣量過(guò)大，se譜柱過(guò)載造成的。    

3 樣品的特性     有些樣品由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，存在互變異構(gòu)現(xiàn)象，而這種互變異構(gòu)體無(wú)法分開(kāi)，而是以一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡存在。在se譜分析時(shí)，在一個(gè)特定的條件下，一種物質(zhì)將出現(xiàn)雙峰，雙峰靠的很近，基本齊高，不拖尾，條件稍一變化，尤其pH，雙峰現(xiàn)象將消失，如紅霉素等。有的樣品紫外的se譜圖上看不到雙峰，但在LC－MS下，用質(zhì)譜檢測(cè)器，其質(zhì)譜的總離子流圖上較明顯，例如我分析過(guò)的農(nóng)藥啶蟲瞇（吡蟲清）。    

4 參數(shù) 記錄的參數(shù)一般都內(nèi)定的，不必修改，但GC和HPLC的參數(shù)是不*一致的，例如C－R3A數(shù)據(jù)記錄儀上的一般記錄時(shí)間間隔GC為2ms，HPLC     為5ms，如果記錄間隔時(shí)間縮短，一個(gè)峰將變?yōu)槎€(gè)峰或更多。