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單細(xì)胞分離用于細(xì)胞鋪板的原理
單細(xì)胞分離儀為細(xì)胞鋪板提供了全新解決方案。該設(shè)備采用新的微流體技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)快速，，準(zhǔn)確的細(xì)胞鋪板工作并且分離過程輕柔，不會影響細(xì)胞的后續(xù)生長，能廣泛應(yīng)用于單抗開發(fā)中的CLD環(huán)節(jié)，以及單細(xì)胞測序等。
單細(xì)胞分離用于細(xì)胞鋪板的原理如下：
將細(xì)胞通過一次性的芯片上端加樣孔，注入到芯片腔體中。單細(xì)胞流在微流控通道中流過激光檢測區(qū)域，機(jī)器能對細(xì)胞進(jìn)行識別，去除掉細(xì)胞碎片，死細(xì)胞以及狀態(tài)較差的細(xì)胞，使得落到孔板中的細(xì)胞都具有很好的活性。高速電子閥門能夠捕獲每一個活性細(xì)胞，終形成1ul體積的液滴，輕柔地落進(jìn)孔板中。整個過程對細(xì)胞的損傷可以忽略不計，所以分選得到的細(xì)胞絕大多數(shù)的細(xì)胞都能再次分裂生長。
單細(xì)胞鋪板整個過程非常快速，一般一塊9孔板分選需要1min左右，單個細(xì)胞一個孔的比例在85%~90%，一般細(xì)胞復(fù)蘇的比例在40%~65%。傳統(tǒng)的細(xì)胞鋪板一般采用手動的有限稀釋法來進(jìn)行，這種方法在需要的操作簡單，只需要普通的排槍就能實現(xiàn)，但是效果卻很不理想。主要體現(xiàn)在：一致性差，有效孔比例低下，耗費(fèi)時間等。
近年來，單抗藥物的開發(fā)領(lǐng)域又被推上了一個新的高度，越來越多的公司都紛紛投入到這個熱潮當(dāng)中，隨之而來的相關(guān)法規(guī)的要求也是越來越嚴(yán)格。在眾多的要求當(dāng)中，對藥物來源的單克隆源性的要求嚴(yán)格，這就要求生產(chǎn)和研發(fā)的企業(yè)在細(xì)胞株開發(fā)階段做到嚴(yán)格的單克隆驗證。目前市面上已經(jīng)有幾款孔板掃描設(shè)備能夠得到認(rèn)可，他們的數(shù)據(jù)可以用來作為單克隆源性的證明。
在這里我們要討論的是在驗證前的分離階段，如何快速、準(zhǔn)確、的獲得單細(xì)胞，除了上面提到的有限稀釋法之外，流式細(xì)胞分選儀也可以用來作為單細(xì)胞鋪板工具之一，當(dāng)然流式除了操作復(fù)雜，需要專人維護(hù)之外，分選得到的細(xì)胞常常復(fù)蘇比例比較低。在流式分選中，細(xì)胞的損傷比較大。
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