細(xì)胞名稱

SK-BR-3 人乳腺癌細(xì)胞

貨號(hào)

H099

種屬

人

細(xì)胞來源

ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進(jìn)

生長(zhǎng)特性

貼壁  上皮細(xì)胞樣

培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基：DMEM90%+ FBS 10%（推薦HAKATA優(yōu)等胎牛血清，貨號(hào):HN-FBS-50）

溫度：37℃     氣相：95%空氣,5% CO2

傳代

1. 用75%酒精噴灑整個(gè)培養(yǎng)瓶消毒，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行1-3小時(shí)的緩沖，.然后置于無菌操作臺(tái)，打開瓶口，將舊培養(yǎng)基更換成5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液或傳代，每2至3天加入新鮮培養(yǎng)基（根據(jù)細(xì)胞密度）;

2. 通過添加新鮮培養(yǎng)基來維持培養(yǎng)?；蛘呖梢酝ㄟ^離心去除舊培養(yǎng)基，再加入新培養(yǎng)基并以5-10×105個(gè)活細(xì)胞/mL的密度再懸浮進(jìn)行培養(yǎng)。建議將細(xì)胞密度維持在5×105個(gè)至1×106個(gè)細(xì)胞/mL之間。

保存

凍存條件：70%*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO

(備注：建議使用本公司的冷凍液（H-W-100），用4度保存的冷凍液直接重懸細(xì)胞，不能預(yù)熱后使用。)

保存條件：液氮存儲(chǔ)

供應(yīng)限制

僅供研究之用

常見問題及解決方案

1.培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2.收到細(xì)胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加 10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間長(zhǎng)不宜超過 72 小時(shí)）

3.細(xì)胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2小時(shí)后觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留8-10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。