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細(xì)胞生長不良的常見原因及解決方法
| 問題/原因 | 解決方案 |
|---|---|
| 從庫存中解凍后沒有或幾乎沒有活細(xì)胞 | |
| 細(xì)胞狀態(tài)很差 | 確保培養(yǎng)物已被正確鑒定，并且是健康的，沒有微生物污染，并且在生長的對數(shù)期后期（80-90％匯合）。 輕輕收獲細(xì)胞以防止損壞。 |
| 細(xì)胞凍存不正確 | 在液氮中凍存時，確保細(xì)胞，培養(yǎng)基和其他試劑 的濃度-以及冷凍方案-遵循供應(yīng)商的建議。通常，細(xì)胞凍存應(yīng)該以每分鐘約1至3℃的速度緩慢進(jìn)行，以使冰晶形成小化。 使用電子可編程或機(jī)械冷凍裝置，以確保一致和適當(dāng)?shù)睦鋬鏊俣取榧?xì)胞選擇合適的細(xì)胞凍存液。如果使用甘油，請不要將其存放在光線下，因為光照會將甘油轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性。 |
| 細(xì)胞凍存不正確 | 凍存應(yīng)始終保持在-130°C以下的溫度，盡可能是在液氮中，以確保大的生存能力。在液氮上方的氣相中儲存優(yōu)選儲存在液體本身中，因為如果液氮泄漏到冷凍管中，則在解凍期間存在小瓶爆炸的風(fēng)險。 |
| 細(xì)胞復(fù)蘇不正確 | 復(fù)蘇細(xì)胞時，請遵循供應(yīng)商推薦的方案。通常，細(xì)胞應(yīng)快速解凍。使用預(yù)熱的媒體。 盡快去除含有細(xì)胞凍存液的培養(yǎng)基，以防止活力降低。 確保小心處理細(xì)胞。不要高速渦旋或離心，因為細(xì)胞在冷凍保存后特別容易受損。 |
| 從庫存或傳代解凍后細(xì)胞貼壁不良 | |
| 塑料容器上靜電積聚（濕度低時尤其有問題） | 增加室內(nèi)濕度。 用（消毒的）濕毛巾擦拭培養(yǎng)皿外。 使用防靜電裝置。 |
| 細(xì)胞，培養(yǎng)基和/或其他試劑的混合不充分 | 確保細(xì)胞和所有試劑的溶液充分混合。 |
| 滾瓶的旋轉(zhuǎn)速度太快 | 以較慢的速度旋轉(zhuǎn)瓶子。 |
| 細(xì)胞生長緩慢 | |
| 細(xì)胞傳代次數(shù)過多 | 獲得已經(jīng)傳代培養(yǎng)較少次數(shù)的新細(xì)胞。 |
| 收獲時細(xì)胞太融合 | 從新的細(xì)胞儲備開始，在生長的對數(shù)期收獲，然后達(dá)到100％匯合。 |
| 培養(yǎng)基，血清，緩沖液等質(zhì)量差或配方不正確 | 丟棄當(dāng)前試劑并使用新批次。 |
 CO 2電平不匹配是什么媒體的碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)需要被使用，從而導(dǎo)致控制pH值不足 | 確保培養(yǎng)箱CO 2 水平與緩沖系統(tǒng)所需的水平相匹配。通常，緩沖液中碳酸氫鹽的濃度越高 ，培養(yǎng)箱氣體混合物中所需的CO 2濃度越高。 |
| 微生物（尤其是支原體）污染 | 有關(guān) 預(yù)防和消除微生物污染的詳細(xì)實踐，請參閱 污染問題。 |
| 將培養(yǎng)物暴露于熒光下會使光敏介質(zhì)成分（核黃素，色氨酸和HEPES）轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性自由基和H 2 O 2 | 將細(xì)胞和培養(yǎng)基存放在黑暗中，遠(yuǎn)離熒光燈。 |
| 不準(zhǔn)確的細(xì)胞計數(shù)方法導(dǎo)致假定的細(xì)胞生長不良 | 確保計數(shù)樣品充分混合，以避免細(xì)胞密度的局部變化，從而影響細(xì)胞計數(shù)的準(zhǔn)確性。 使用血細(xì)胞計數(shù)器的手動方法重新檢查用于確定計數(shù)的所有計算，或考慮自動細(xì)胞計數(shù)。 |
| 細(xì)胞生長不均勻 | |
| 容器內(nèi)不均勻的細(xì)胞生長表明細(xì)胞和/或培養(yǎng)基的混合不充分 | 確保通過溫和的渦旋或移液將細(xì)胞混合物和所有試劑適當(dāng)混合，以避免局部濃度變化。 |
| 在同一時間生長的可能相同的血管之間的不均勻細(xì)胞生長可能是由于培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度變化 | 盡可能避免將培養(yǎng)皿堆疊在一起，因為底部的容器靠近金屬架，并且可以快地加熱。 當(dāng)儲存在孵化器前部的容器比后部儲存的容器生長較少時，請注意盡可能保持孵化器門關(guān)閉，并將容器向后移動。 |
| 具體增長模式： | |
| 培養(yǎng)箱中蒸發(fā)不均勻?qū)е屡囵B(yǎng)基體積減少和多孔板外孔生長不良 | 保持水庫充分加濕CO 2和其他傳入的氣體。如有必要，在孵化器中創(chuàng)建一個蒸發(fā)“熱點”的地圖，以避免在隨后的實驗中。 |
| 孵化器振動導(dǎo)致同心環(huán)（在餐具中），平行條或不規(guī)則圖案（在燒瓶中） | 將孵化器放置在堅固的表面上，而不與低流量區(qū)域的其他設(shè)備共用。盡可能遠(yuǎn)離其他電動設(shè)備。 |
| 由于架子的金屬比周圍區(qū)域提供更多的熱量，因此稍微過高或稍微過低的培養(yǎng)箱溫度會分別導(dǎo)致點狀或交叉影線的圖案。細(xì)胞密度較高的點表明不與金屬接觸的細(xì)胞生長更好; 交叉影線表明細(xì)胞更喜歡溫暖的區(qū)域而不是金屬。 |  根據(jù)需要調(diào)整培養(yǎng)箱溫度，注意盡量減少培養(yǎng)箱打開的時間，從而導(dǎo)致熱量損失。裝有介質(zhì)的假容器也可用于隔離與貨架的接觸。 |
| 非水平的培養(yǎng)箱架可導(dǎo)致不均勻的細(xì)胞密度 | 在使用之前，以及在孵化器清潔和維修之后使用水平擱板。 |
| 培養(yǎng)基中存在氣泡導(dǎo)致清晰的條帶（在滾瓶中），沒有細(xì)胞生長的斑點（在燒瓶和餐具中） | 小心地倒入或移取介質(zhì)以避免氣泡。 |
| 冷凝導(dǎo)致垂直條紋（在滾瓶和燒瓶中） | 不要讓容器暴露在培養(yǎng)箱外的較冷溫度超過必要時間。使用前立即從培養(yǎng)箱中取出容器。 |
| 太小的介質(zhì)體積沿著餐具和燒瓶的側(cè)壁產(chǎn)生增加的細(xì)胞密度環(huán)。這是由于彎月面的曲線在燒瓶或井的中心形成了介質(zhì)貧乏區(qū)域。 | 向培養(yǎng)皿中加入足量的培養(yǎng)基。一般準(zhǔn)則是每cm 2生長區(qū)域0.2-0.3mL培養(yǎng)基 |
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