引言

在單克隆細胞培養(yǎng)時，手動有限稀釋法是經典的分離單細胞手段之一。這種方式分離單細胞，每個孔中落進去的細胞數目符合泊松分布。依靠單細胞分選儀器分離單細胞的效率，無論從分選能力還是重復性都要明顯優(yōu)于手動的有限稀釋方法。測定一款設備分選效率的標準方法，是用熒光校準微球來分選檢驗。

實驗方法

Namocell單細胞分離儀通過檢測FITC熒光信號，來分選熒光校準微球（Spherotech）和用Calcein AM（Thermo Fisher Scientific）染色的CHO-S細胞。對于分離的細胞可以用Calcein AM染色，用于區(qū)分碎片、死細胞和活細胞，然后可以根據Namocell推薦的操作流程分離單個活細胞。為了去除細胞結團，在染色之后可以用40um左右的細胞篩網過濾細胞，盡量保證在上樣的時候樣本都是單個細胞。作為對照，我們采用1cell/well的細胞密度進行手動有限稀釋法鋪板。然后，用顯微鏡在明場下觀察每個孔的細胞（或者微球）的數量。同樣的實驗持續(xù)7天，每天做一組對比實驗，后取平均值。通過統計孔板中單細胞、兩個細胞和空孔的數量來衡量儀器的分選效率。

實驗結論

在圖例中展示了，用Namocell單細胞分離儀分離的微球和細胞以及手動鋪板的數據對比。通過Namocell單細胞分離儀分選的熒光微球保持了很好的一致性---單細胞97%，兩個細胞1%，空白2%。通過Namocell單細胞分離儀分選的細胞樣本---單細胞93%，兩個細胞2%，空白5%。對照樣本數據，通過手動有限稀釋法得到的分選效率---單細胞31%，兩個細胞35%，空白34%。

在細胞樣本的分散程度比較好的狀態(tài)下，機器分離的高單細胞比例是97%。對于手動有限稀釋法而言，實驗的結果一致性比較差（通過標準差可以看出）。綜上所述，Namocell單細胞分離儀的分選效率和一致性要遠優(yōu)于手動有限稀釋法。

圖例：機器分離的微球和細胞的平均分選效率和手動分離的對比。