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間接法中如何提高進口elisa試劑盒陽性值

來源:上海研生實業(yè)有限公司   2018年12月13日 11:38  

      近日有客戶進口elisa試劑盒間接法中,如何提高陽性值,在抗原濃度不變的情況下?他用自己的抗原包被的板子,用自己的酶標二抗和顯色液做,陽性值很低,為OD 0.5。但是試劑盒中的酶標二抗和顯色液做,陽性值卻很高OD 1.4,這樣看來我的抗原應該沒問題,好像問題出在酶標二抗上,請勁馬技術幫忙分析。根據(jù)客戶留言在網(wǎng)上問題解答如下:

    先要確定兩種酶標二抗使用的是不是同一批包被的板,因為雖然是相同的抗原,可能兩次包被不一樣。

    如果是同一批板,出現(xiàn)這種情況只能說明你的酶標二抗失活了,買新的二抗,按說明書上的稀釋倍數(shù)稀釋;陰性對照有顏色很可能是沒封閉好。陽性值是由你的抗原抗體間親和力決定的,增加抗原抗體用量,或提高二抗?jié)舛?,但靈敏度可能會降低,你可以重新摸下工作濃度;

    陰性值降低,你可以采用BSA封閉2小時看看,好像沒聽說有人用FCS封閉的,你可以嘗試采用其他的封閉液,據(jù)我了解,用BSA封閉不是很好,可以試試脫脂奶粉;再就是TMB本身時間長了就會略顯色,你可以調整顯色時間。

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