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乙酰膽堿酯酶(AChE)活性發(fā)光檢測方法

來源:上海遠慕生物科技有限公司   2018年08月17日 09:32  

    乙酰膽堿(acetylcholine,ACh)是一種神經(jīng)遞質(zhì),能特異性的作用于各類膽堿受體。乙酰膽堿參與神經(jīng)遞質(zhì)過程,在下一次神經(jīng)沖動開始前乙酰膽堿會被AChE 降解掉。AChE 會被神經(jīng)內(nèi)毒素和殺蟲劑所抑制,由于神經(jīng)內(nèi)毒素和殺蟲劑對人和動物的嚴重毒副作用而成為很多科學家所關注的一個領域。另外,在一些疾病治療過程中,例如在Alzheimer's 疾病中,研究人員也對AChE 抑制劑可能產(chǎn)生的功能進行了研究。


    AChE 活性檢測試劑盒使用乙酰膽堿經(jīng)過一系列酶促反應,在發(fā)光反應中快速地將反應中活性AChE 的量以光信號形式輸出。樣品中的AChE 抑制劑的存在使得樣品中ATP 水平升高,這可以通過發(fā)光來定量。


    檢測方法:
    以aCella – AchE檢測試劑盒為例
    1. 試劑準備
    將A、B、C三個溶液分別避光溶解,并且平衡到室溫。
    2. 樣品準備
    對照1:加入溶液50ulC,不包含AChE,代表100%抑制
    對照2:加入溶液50ulA,不加入樣品或抑制劑,代表無抑制
    樣品:加入10-50ul樣品或抑制劑,重復設置三個復孔
    對以上所有待測液加入50ul溶液B
    3. 檢測結果
    次檢測時,可以對單個樣品多次檢測發(fā)光,每次間隔30秒,以確定反應的穩(wěn)定時間。
    然后所有樣品在這個時間點上檢測發(fā)光值。

 

    參考文獻:
    Schallreuter KU et al. Activation/deactivation of acetylcholinesterase by H2O2: more evidence for oxidative stress in vitiligo. Biochem Biophys Res Commun. 2004 Mar 5;315(2):502-8.
    Bolognesi ML et al. Propidium-based polyamine ligands as potent inhibitors of acetylcholinesterase and acetylcholinesterase-induced amyloid-beta aggregation. J Med Chem. 2005 Jan 13;48(1):24-7.

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