石蠟切片組織馮庫(kù)薩染色試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

 石蠟切片組織馮庫(kù)薩（VON KOSSA）染色試劑是一種旨在使用標(biāo)準(zhǔn)化的化學(xué)分離石蠟方法和銀還原技術(shù)，分析存檔中的石蠟包埋的組織切片中鈣沉積現(xiàn)象的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良VON KOSSA方法、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于石蠟包埋組織切片的鈣沉積和鈣化結(jié)節(jié)檢測(cè)。廣泛用于骨細(xì)胞或組織病理生理的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

技術(shù)背景

鈣鹽變化是骨細(xì)胞增殖分化和骨組織成骨潛能的標(biāo)志之一。通過(guò)嗜銀染色，鈣離子受到強(qiáng)光還原，由金屬銀沉積取代，呈現(xiàn)黑色。

產(chǎn)品內(nèi)容

 去石蠟液（Reagent A）       自備

 補(bǔ)水液A（Reagent B）  100毫升

 補(bǔ)水液B（Reagent C）  100毫升

 補(bǔ)水液C（Reagent D）  100毫升

 補(bǔ)水液D（Reagent E）  100毫升

 清理液（Reagent F）  120毫升

 染色液（Reagent G）   5毫升

 平衡液（Reagent H）   5毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)   1份

保存方式

保存在4℃冰箱里； 染色液（Reagent G），避免光照；有效保證6月

用戶自備

核固紅復(fù)染試劑盒（GMS40011）：用于常規(guī)染色后復(fù)染

小型染色缸：用于石蠟切片的去石蠟和染色操作

60瓦燈：用于還原鈣離子

光學(xué)顯微鏡：用于組織細(xì)胞染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

• 去石蠟處理

• 取出10片待測(cè)的石蠟包埋的組織切片（注意：石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時(shí)，此步很重要）
• （選擇步驟）放進(jìn)80℃烘箱，孵育30分鐘
• （選擇步驟）室溫下靜置15分鐘
• 按下表依次放進(jìn)小染色缸里孵育

• 小心移去切片上的 補(bǔ)水液D（Reagent E）
• 小心加上200微升 清理液（Reagent F）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent F） 

二、 樣本染色處理

• 小心加上100微升 染色液（Reagent G），鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下置于太陽(yáng)光直射或60瓦燈直射孵育60分鐘；或直至可見(jiàn)黑色
• 小心移去切片上的 染色液（Reagent G） 
• 室溫下，小心將切片置入50毫升 清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 輕輕移去切片上的 清理液（Reagent F） 

三、 樣本復(fù)染處理

• 小心加上100微升 平衡液（Reagent H）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘（注意： 平衡液（Reagent H）具有褪色調(diào)節(jié)作用）
• 小心移去切片上的 平衡液（Reagent H）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升 清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent F） 
• （選擇步驟）樣本復(fù)染處理（核固紅）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：鈣沉積陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)黑色（如果復(fù)染：細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)粉紅色，細(xì)胞核呈現(xiàn)紅色）

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 操作時(shí)，須戴手套
• 石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時(shí)，否則造成樣品支離破碎
• 用戶可以使用二甲苯代替脫蠟液（ReagentA)
• 所有操作在室溫下進(jìn)行
• 每次更換試劑溶液時(shí)，保持切片面基本晾干。空氣中晾干狀態(tài)為沒(méi)有水滴，呈濕潤(rùn)狀態(tài)，可見(jiàn)反光
• 試劑溶液在切片表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿切片表面
• 樣品染色避免過(guò)度，肉眼可見(jiàn)黑色即可終止染色
• 建議使用 核固紅復(fù)染試劑盒（GMS40011）
• 組織細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察
• 本公司提供系列組織細(xì)胞金屬元素染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰