石蠟切片淀粉樣蛋白（AMYLOID）硫磺素T（thioflavine T）熒光染色試劑盒

產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

 石蠟切片淀粉樣蛋白（AMYLOID）硫磺素T（thioflavine T）熒光染色試劑是一種旨在使用標(biāo)準(zhǔn)化的化學(xué)分離石蠟方法和硫磺素T染色技術(shù)，與淀粉樣蛋白結(jié)合，來分析存檔中的石蠟包埋的組織切片中蘋果綠熒光現(xiàn)象的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于石蠟包埋組織切片的淀粉樣蛋白檢測(cè)。廣泛用于淀粉樣蛋白樣疾病的病理生理的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，熒光清晰。

技術(shù)背景

淀粉樣蛋白（AMYLOID）是一種同質(zhì)性、嗜伊紅性（eosinophilic）、不溶性的纖維蛋白（fibrous protein）聚合體，具有共同的β交叉折疊層（β sheet）組織結(jié)構(gòu)特征，沉積在細(xì)胞外。蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊（misfolding），且異常自我聚集將導(dǎo)致淀粉樣變性（amyloidosis），細(xì)胞毒纖維沉積，產(chǎn)生組織損傷，進(jìn)而引起23種不同淀粉樣蛋白綜合癥，超過400種疾病，包括阿茨漢姆癥、巴金森氏癥、II型糖尿病、白內(nèi)障、朊病毒疾病等。淀粉樣蛋白斑（amyloid plaque）和神經(jīng)纖維纏結(jié)（neurofibrillary tangles；NFT）是淀粉樣蛋白綜合征的病理性特征。硫磺素T（thioflavine T），陽離子苯并噻唑（benzothiazole）衍生物，在鹽酸的參與下，通過脫氫硫甲苯胺（dehydrothiotoluidine）的甲基化而成，是zui常用的淀粉樣蛋白熒光探針，體內(nèi)或體外識(shí)別顯示和定量分析纖維化動(dòng)力學(xué)。較之硫磺素S（thioflavine S），硫磺素T更為穩(wěn)定和廣譜，體內(nèi)檢測(cè)更佳，尤其適合在液體狀態(tài)下檢測(cè)。一旦與淀粉樣蛋白纖維（寡聚體）結(jié)合，其熒光強(qiáng)度（激發(fā)波長(zhǎng)440nm，散發(fā)波長(zhǎng)490nm），顯著增強(qiáng)，呈現(xiàn)蘋果綠熒光。

產(chǎn)品內(nèi)容

 脫蠟液（Reagent A）         300毫升（自備）

 補(bǔ)水液A（Reagent B）  100毫升

 補(bǔ)水液B（Reagent C）  100毫升

 補(bǔ)水液C（Reagent D）  100毫升

 清理液（Reagent E）  150毫升

 染色液（Reagent F）   10毫升

 強(qiáng)化液（Reagent G）   10毫升

產(chǎn)品說明書    1份

保存方式

保存 染色液（Reagent F）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里； 染色液（Reagent F），避免光照；試劑具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證3月

用戶自備

小型染色缸：用于石蠟切片的脫蠟操作

（共聚焦）熒光顯微鏡：用于組織細(xì)胞染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

• 脫蠟處理

• 取出10片待測(cè)的石蠟包埋的組織切片（注意：石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時(shí)，此步很重要）
• （選擇操作）放進(jìn)80℃烘箱，孵育30分鐘
• （選擇操作）室溫下靜置15分鐘
• 按下表依次放進(jìn)小染色缸里孵育

• 小心移去切片上的 補(bǔ)水液C（Reagent D）
• 小心加上200微升 清理液（Reagent E）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent E）

二、樣本染色處理

• 小心加上200微升 染色液（Reagent F），鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育10分鐘，避免光照
• 小心移去切片上的 染色液（Reagent F）
• 小心加上200微升 清理液（Reagent E）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育1分鐘
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent E）
• 小心加上200微升 強(qiáng)化液（Reagent G），鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育10分鐘 
• 小心移去切片上的 強(qiáng)化液（Reagent G）
• 小心加上200微升 清理液（Reagent E）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育3分鐘
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent E）
• 封片
• 即刻在（共聚焦）熒光顯微鏡下（激發(fā)波長(zhǎng)440nm，散發(fā)波長(zhǎng)490nm）觀察：

淀粉樣蛋白：呈現(xiàn)蘋果綠熒光

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 操作時(shí)，須帶手套
• 石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時(shí)，否則造成樣品支離破碎
• 建議用戶使用二甲苯替代 脫蠟液（Reagent A）
• 試劑具有腐蝕性，注意操作安全
• 試劑溶液在樣品表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿樣品表面
• 組織細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行熒光顯微鏡觀察 
• 槲皮素（Quercetin）、姜黃色素（curcumin）、 藜蘆醇（resveratrol）等會(huì)干擾檢測(cè)
• 本公司提供系列淀粉樣蛋白染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰