腫瘤細(xì)胞很多化合物都可以作為凍存保護(hù)劑，它們既可以單獨使用也可以聯(lián)合使用，例如糖、血清和去污劑。雖然凍存沒有的準(zhǔn)則，但是大家普遍認(rèn)為二甲基亞砜（DMSO）和甘油是保護(hù)活細(xì)胞和組織使用zui廣泛且zui有效的凍存保護(hù)劑。其他凍存保護(hù)劑可根據(jù)情況使用，可單獨使用也可聯(lián)合使用，包括：聚乙烯乙二醇（polyethylene glycol），丙烯乙二醇（propylene  glycol），甘油（glycerine），聚乙烯吡咯烷酮（polyvinylpyrolidone），山梨醇（sorbitol），右旋糖苷（dextran），海藻糖（trehalose）。
凍存組織和整個器官的需求，促進(jìn)了凍存方法的發(fā)展，新方法也提高了凍存腫瘤細(xì)胞和有機(jī)體的復(fù)蘇。這些方法包括改變凍存保護(hù)劑的濃度和加入添加劑，避免凍存過程引發(fā)的細(xì)胞調(diào)亡或 程序性死亡。多年來人們一直認(rèn)為，是凍存過程中產(chǎn)生的細(xì)胞內(nèi)物理變化或損壞，造成凍存后細(xì)胞的死亡。而zui近有研究發(fā)現(xiàn)，一些更為精細(xì)的胞內(nèi)活動可能導(dǎo)致了細(xì)胞死亡，而這些活動可在一定程度上受控于適當(dāng)?shù)膬龃嫣砑觿?br />凍存過程中，凍存保護(hù)劑有多種功能。例如，DMSO 可以降低冰點，促進(jìn)細(xì)胞在胞內(nèi)冰晶形成之前脫水更加*。普遍認(rèn)為，當(dāng)凍存保護(hù)劑可有效穿透細(xì)胞，延遲胞內(nèi)冰晶形成，降低溶液效應(yīng)時，凍存保護(hù)的效果*。另外，需要根據(jù)凍存的細(xì)胞類型來選擇凍存保護(hù)劑。對絕大多數(shù)細(xì)胞來說，甘油是更好的選擇，因為它的毒性比DMSO 小。但是，DMSO 具有更好的滲透性， 通常作為較大型較復(fù)雜的細(xì)胞凍存，如原生生物。在添加到細(xì)胞懸液之前，凍存保護(hù)劑應(yīng)該用新鮮培養(yǎng)基稀釋到適宜濃度，這能zui小化潛在的化學(xué)反應(yīng)損害，并確保腫瘤細(xì)胞能均一接觸到保護(hù)劑，減少毒害效應(yīng)。DMSO 和甘油通常使用的濃度范圍為 5-10%（v/ v）。除了用于植物細(xì)胞，二者一般不聯(lián)合使用。