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ELISA實驗原理

來源:研域生物技術(上海)有限公司   2017年05月05日 10:18  

ELISA是以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相聯(lián)絡起來的一種敏感性很高的實驗技術。免疫酶技術是將酶標記在抗體/抗原分子上,構成酶標抗體/酶標抗原,稱為酶聯(lián)絡物。該酶聯(lián)絡物的酶在免疫反 應后,作用于底物使之呈色,根據(jù)顏色的有無和深淺,定位或定量抗原/抗體。ELISA 法是免疫酶技術的一種,其特點是運用聚苯乙烯微量反應板(或球)吸附抗原/抗體,使之固相化,免疫反應和酶促反應都在其間進行。在每次反應后都要重復洗 滌,這既保證了反應的定量聯(lián)絡,也避免了末反應的游離抗體/抗原的分離進程。ELISA試劑盒在ELISA 法中。酶促反應只進行一次,而 抗原、抗體的免疫反應可進行一次或數(shù)次,即可用二抗(抗抗體)、三抗再次進行免疫反應。
   
如今常用的幾種ELISA方法有:測定抗體的直接法,測定抗原的雙抗體夾心法和測定抗原的競爭法等。本實驗選用直接法測定單克隆抗體效價。其主要進程為:首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應板的凹孔內,加待測抗體,保溫后洗刷以除掉未聯(lián)絡的雜蛋白質,加酶標抗抗體,保溫后洗刷,加底物保溫30分鐘后,加酸或堿中止酶促反應,用目測或光電 
比色測定抗體含量。

 

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