Bradford蛋白定量試劑盒

產(chǎn)品簡介：

目前世界上zui常用的蛋白濃度檢測方法是：BCA蛋白定量試劑盒(BCA Protein Assay Kit)和Bradford蛋白定量試劑盒(Bradford Protein Assay Kit) 。Bradford 法與傳統(tǒng)方法相比，更簡單、更穩(wěn)定、兼容性更好。Bradford法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達(dá)1M，DTT的濃度可高達(dá)5mM。但受高濃度的去垢劑的影響明顯， 故在用Bradford Protein Assay Kit進(jìn)行蛋白定量時(shí)，需確保SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20, 60, 80低于0.015%。含高濃度去污劑的蛋白定量，建議采用BCA Protein Assay Kit。

Bradford Protein Assay Kit主要由G250、緩沖液等組成，檢測速度很快，少量樣品一般只需10min即可完成檢測。檢測濃度下限達(dá)到25μg/ml，zui小檢測蛋白量達(dá)到0.5μg，待測樣品體積為1～20μl。在50~1000μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1、 酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)

2、 蒸餾水

3、 96孔板

操作步驟(僅供參考)：

1、 *溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA 5mg/ml)，按蛋白標(biāo)準(zhǔn):稀釋液=1:9進(jìn)行稀釋，如取蛋白標(biāo)準(zhǔn)10μl稀釋溶解于稀釋液90μl，使其終濃度為0.5mg/ml。注意：蛋白樣品在什么溶液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)用什么溶液稀釋。也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA 5mg/ml)。

2、 將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)孔中，加蛋白標(biāo)準(zhǔn)稀釋液補(bǔ)足至20μl。

3、 加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中，補(bǔ)加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液至20μl。

4、 各孔加入200μl G250染色液，室溫放置3～5min。

5、 酶標(biāo)儀測定595nm波長處的吸光值，560~610nm之間的波長也可。

6、 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中的蛋白濃度。

注意事項(xiàng)：

1、 G250染色液回復(fù)至室溫充分混勻后使用，有利于提高檢測的靈敏度。

2、 蛋白標(biāo)準(zhǔn)在全部溶解后先混勻，再稀釋成一系列不同濃度的蛋白標(biāo)準(zhǔn)。

3、 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致，有可能導(dǎo)致測定不準(zhǔn)確。

4、 需可檢測560~610nm之間波長的酶標(biāo)儀一臺，*檢測波長為595nm。

5、 建議每次測定時(shí)都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因?yàn)闇y定時(shí)顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非控制顯色反應(yīng)的時(shí)間和溫度，否則如需測定應(yīng)每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

6、 如果沒有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計(jì)測定，但測定時(shí)，考慮根據(jù)比色皿的zui小檢測體積。應(yīng)按比例適當(dāng)加大G250染色液的用量使總體積不小于zui小檢測體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量亦相應(yīng)按比例放大。使用分光光度計(jì)測定蛋白濃度時(shí)，每個(gè)試劑盒可以測定的樣品數(shù)量可能會(huì)顯著減少。

7、 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期： 12個(gè)月有效。