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找到Z適合你實驗的抗體

來源:上??婆d商貿(mào)有限公司   2017年03月09日 08:28  

 

細(xì)胞生物學(xué)家的論文手稿基本上都準(zhǔn)備好了,這時他打算再檢查核對一下他的抗體:Lange對缺失G蛋白偶聯(lián)受體的小鼠樣品進(jìn)行染色,按道理說抗體不會出現(xiàn)信號。然而結(jié)果卻是它顯色了,專家只好把他論文中基于抗體的這部分刪去,而剩下的一部分卻不足以吸引人了。

這令Lange失望極了,不過值得安慰的是,他并不是*一個有此體驗的實驗人員,抗體可以說是生物學(xué)實驗室里zui常用,也zui容易出現(xiàn)問題的試劑,而且這種試劑還不便宜。來自Mol Cell Proteomics雜志的一項研究指出,在被檢測的5000種商用抗體中, 只有一半能在Western blotting和免疫組化實驗中均有效,一些研究人員還認(rèn)為問題抗體是許多科學(xué)研究無法重復(fù)的罪魁禍?zhǔn)住he Scientist收集的一些小Tips也許能幫助你發(fā)現(xiàn)實驗中zui靈敏,特異性zui強(qiáng),以及實驗可重復(fù)的抗體。

毋庸置疑,實驗前首先需要科學(xué)文獻(xiàn),檢查一下其他研究人員追蹤你的興趣靶標(biāo)時用的是什么抗體。一些廠家和(譬如 antibodypedia.com 和 CiteAb.com )都會列出抗體參考文件。

仔細(xì)的翻查這些論文,看看這些論文是否發(fā)表在期刊上?作者是否展示了全部Western blots,從中是否能看到其它非特異性條帶?他們是否用了合適的對照? 

不要以為發(fā)表論文中采用zui多的抗體就你,蛋白質(zhì)組學(xué)研究專家。通常每個人使用的都是前人*次用的那個抗體。

理智選擇抗體產(chǎn)品

目前抗體市場上的一大問題就是制造廠商并不一定就是銷售方??贵w目錄上有這么多的種類,很少有人會去確保每種產(chǎn)品都有效。

為了確保購買有效的抗體,我們需要仔細(xì)審查賣方提供的資料。是否能提供令人信服的數(shù)據(jù)來確保抗體適合于你的實驗?如果需要的是一種修飾后蛋白的特殊抗體,比如乙?;蟮牡鞍祝敲粗圃焐淌┓ㄟM(jìn)行了肽段array,針對幾種不同的蛋白修飾進(jìn)行驗證。

專家建議檢查供應(yīng)商提供同一靶標(biāo)的所有產(chǎn)品,如果分子量或者細(xì)胞位置在結(jié)合同一抗原的抗體之間存在差異,那么就值得懷疑。你可以挑選一些抗體進(jìn)行嘗試,不過值得注意的是,如果你在不同銷售商處發(fā)現(xiàn)了同樣的數(shù)據(jù)表,那么也許就是打著不同招牌,在賣同樣的東西。

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