實驗步驟    
基 本 方 案 小 鼠 干 擾 素 誘 導(dǎo) 的 抗 病 毒 活 性 的 檢 測

材 料

干擾素敏感的 L 929 成纖維細(xì)胞

E M E M 培 養(yǎng) 基（Eagle 氏zui低要求培養(yǎng)基）

胰酶消化液
檢 測 樣 品（具干擾素活性的血清或培養(yǎng)上清）

小鼠干擾素的參照標(biāo)準(zhǔn)品 α -干擾素、β-干擾素、 γ-干 擾 素 以 及 αβ-干擾素（從美國馬里蘭州貝塞斯達(dá)國家過敏與感染疾病研究院 Laughlin 博士處獲得）

水 皰 性 口 炎 病 毒（vesicular stomatitis virus， V S V ; 印第安納株）

4°C 的 EBSS (Earles 平衡鹽溶液）

5 % (W V ) 福爾馬林

含 0.05% (m /V ) 結(jié) 晶 紫 的 2 0 % 乙醇

1 0 0 % 甲 醇（可選）

75c m 2 的直頸組織培養(yǎng)瓶（Falcon 或 Costar)

8 通 道 微 量 移 液 器（固定或調(diào)整至 50M1 和 IOOiLd; Costar)

9 6 孔 平 底 微 孔 板（Falcon 或 Costar)

8 孔 吸 液 器（D r u m m o n d ; Thomas Scientific)

倒置顯微鏡

定 軌 搖 床（可選）

微量 滴 定 板 讀 板 儀（酶聯(lián)儀）（可選）

1 . 將 約 I X l O6干 擾 素 敏 感 的 L 9 2 9 成 纖 維 細(xì) 胞 懸 于 25 ml E M E M 培 養(yǎng) 基 中 ，接種至75 cm2 組織培養(yǎng)瓶。在 37°C ， 6%(：〇 2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)約 1 周（或直至鋪滿培養(yǎng)瓶）。

2 . 向鋪滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3m l 胰酶消化液，待細(xì)胞從培養(yǎng)瓶底脫離下來后收集獲

輔 助 方 案 1 病毒培養(yǎng)體系的建立

附 加 材 料

輔 助 方 案 2 抗體中和實驗

6 . 測定抗體制品的中和滴度，即中和掉 5 0 % 的 5U /m l 干擾素活性的抗體的zui髙稀釋度的倒數(shù)。

7 . 可選操作：抗體的中和活性以 U /m l 表示。效價乘 以 5 (調(diào) 整 為 中 和 5U /ml) ，再乘以 4 (調(diào)整為相對于加入的樣品和細(xì)胞 4 倍稀釋度的抗體），然 后 再 乘 以 5 (因為檢測的體積為0.2 ml)。

備 選 方 案 人 干 擾 素 誘 導(dǎo) 的 抗 病 毒 活 性 的 檢 測