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綜合評價C18色譜柱性能的實驗方法介紹
閱讀：3382發(fā)布時間：2013-5-17
液相色譜中使用C18柱的反相色譜法以生物體相關物質(zhì)為分析對象，能夠滿足主要研究領域的需要，使用。而隨著硅膠原料、鍵合方式、封尾方式的不同，生產(chǎn)出的色譜柱性能也不同，市場上則因此有數(shù)以百計性能不同的C18柱。而評價這些色譜柱的性能一般需要從以下4點入手：
1、對化合物的保留能力；
2、對酸性及中性化合物的理論塔板數(shù)和峰形；
3、對性（堿性）化合物的峰形；
4、對配位化合物的峰形。
針對上述四點原則，本公司建立了統(tǒng)一的標準，以此來評價自己生產(chǎn)的C18色譜柱。
具體測定方法如下：
樣品：尿嘧啶-甲苯-苯乙烷-阿米替林-醌茜五種物質(zhì)混合物；
CoMetro液相色譜儀-等度系統(tǒng)（包括：6000LDI恒流泵，6000PVW紫外/可見可編程檢測器）；
紫外/可見檢測器：波長210nm；
流動相：5mmol/L磷酸鹽緩沖液（pH=7）-甲醇=20:80；
流速：1.0mL/min；
柱溫：25℃
在此方法下，這五種物質(zhì)的色譜行為都能夠側面反映色譜柱某一項性能的大致情況，有較好的科學性和說服力，這五種物質(zhì)的結構是及具體作用如下：
| 尿嘧啶
| 典型的性化合物，親水性*，在C18色譜柱中幾乎沒有保留，則可以用來測定系統(tǒng)的死時間。 |
| 甲苯/苯乙烷
| 非性化合物，不會與C18色譜柱中的殘余硅羥基作用，則可以用來標定色譜柱的理論塔板數(shù)，同時其峰形良好也是對色譜柱的基本要求。 |
| 阿米替林
| 含氮有機堿，在中性環(huán)境下能形成穩(wěn)定的氮正離子，能與色譜柱中的殘余硅羥基形成靜電作用，其拖尾因子能側面反映色譜柱殘余硅羥基的數(shù)量。 |
| 醌茜
| 典型的螯合物，能與色譜柱中的金屬離子作用，其拖尾因子則可以側面反映出色譜柱中金屬離子的含量。 |
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