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中級(jí)會(huì)員 | 第17年

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研究T細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子的方法

時(shí)間：2011/10/13閱讀：891
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乾思生物編輯整理：
1）研究細(xì)胞因子mRNA的方法
絕大多數(shù)細(xì)胞因子mRNA在T細(xì)胞中只短暫存在，其存在的量與T細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子的量也有很好的相關(guān)性。所以，在大多數(shù)情況下，細(xì)胞內(nèi)mRNA的量可以反映細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子的情況。
檢測(cè)細(xì)胞因子mRNA的試驗(yàn)主要有：競(jìng)爭(zhēng)性聚合酶鏈反應(yīng)、Northern印跡雜交、斑點(diǎn)雜交、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)、原位雜交。
2）研究細(xì)胞因子的免疫檢測(cè)法
免疫檢測(cè)法主要有放射免疫檢測(cè)法、酶免疫測(cè)定法、免疫熒光測(cè)定法和免疫發(fā)光測(cè)定法等。
3）研究細(xì)胞因子的生物學(xué)方法
1．用含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)HT2細(xì)胞。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞2次，每次離心1000×g 10分鐘。
2．取96孔細(xì)胞培養(yǎng)液，每孔加0.1ml含4×103 HT2細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)液。再加0.1ml T細(xì)胞培養(yǎng)上清液或經(jīng)系列稀釋的IL-2標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)稀釋度重復(fù)3孔。在37℃ 5％ CO2的飽和濕度二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。
3．每孔加10μCi（3.7×105Bq）[3H]脫氧胸苷（10μl），在37℃ 5％ CO2的飽和濕度二氧化碳培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4～8小時(shí)。
4．用多孔收集器將細(xì)胞收集到玻璃纖維濾紙上，在液體閃爍計(jì)數(shù)儀中計(jì)數(shù)每分鐘放射活性（cpm）。用cpm對(duì)稀釋度作圖，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)判定T細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-2的含量。

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