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安譜實(shí)驗(yàn)用數(shù)據(jù)說(shuō)話——普洱茶中黃曲霉毒素,嘔吐毒素大揭秘

閱讀:2383      發(fā)布時(shí)間:2017-9-20
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  近日,打假人士方舟子,質(zhì)疑普洱茶中含有黃曲霉毒素,嘔吐毒素等致癌物質(zhì),引起茶界一片嘩然,各界人士及網(wǎng)友們眾說(shuō)紛紜,同時(shí)方舟子也列舉出廣州疾控和南昌大學(xué)碩士論文對(duì)普洱茶相關(guān)毒素的檢測(cè)結(jié)果,所采集樣品均呈陽(yáng)性。面對(duì)如此情況,聚光科技下屬子公司上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司(以下簡(jiǎn)稱“安譜實(shí)驗(yàn)”)立即安排實(shí)驗(yàn),采用液相色譜法對(duì)普洱茶中的黃曲霉毒素,嘔吐毒素進(jìn)行了檢測(cè),用詳實(shí)的數(shù)據(jù)、譜圖來(lái)探究普洱茶中所含毒素的真實(shí)情況。

樣品1:在茶葉商店里選擇了存放長(zhǎng)達(dá)9年的生茶
 
 樣品2:經(jīng)過(guò)發(fā)酵技術(shù)發(fā)酵過(guò)的熟茶
一、普洱茶中黃曲霉毒素的檢測(cè)(參考GB 5009.22-2016 食品中黃曲霉毒素的檢測(cè) 第三法 液相色譜-柱后衍生法)
  樣品前處理
  準(zhǔn)確稱取2 g 粉碎的茶葉試樣,置于50 mL 離心管中,加入10 mL( 乙腈+ 水) 溶液(84+16),渦旋3min,超聲15min,4000rpm離心8min。取4mL 上清液,加12mL PBS 緩沖溶液稀釋,混勻,待凈化
  加標(biāo)溶液:CDGG-116870-03 (o2si 品牌) 黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2 混標(biāo) 1:0.3:1:0.3ppm 25uL
  小柱操作
  黃曲霉毒素免疫親和柱(SBHL-20-0383,Beacon 品牌) 恢復(fù)室溫后,讓柱內(nèi)緩沖液流完。
  上樣:控制流速1d/s
  淋洗:5mL PBS 淋洗,5mL 水淋洗,淋洗完后抽干,
  洗脫:用2mL 甲醇洗脫,控制流速1d/s 50℃氮吹到近干,用流動(dòng)相定容到1mL,過(guò)濾,待進(jìn)樣。
  色譜條件
  a) 流動(dòng)相:A:水,B:甲醇/ 乙腈(16+16)
  b) 色譜柱:CNW Athena C18-WP 液相色譜柱 (4.6*150mm,5um)
  c) 流速:1.0mL/min
  d) 柱溫:40℃
  e) 進(jìn)樣體積:20μL
  f) 檢測(cè)波長(zhǎng):激發(fā)波長(zhǎng)360nm; 發(fā)射波長(zhǎng)440nm
二、普洱茶中嘔吐毒素的檢測(cè)(參考GB 5009.111-2016 食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的測(cè)定 第二法 免疫親和層析凈化液相色譜法)
  樣品前處理
  取2g 茶葉,加入20mL 去離子水,渦旋1min,超聲20min,4000rpm 離心8min,取上清液2mL 過(guò)柱。
  加標(biāo)溶液: CDGG-014445-06 (o2si 品牌) 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇( 嘔吐毒素) 標(biāo)準(zhǔn)品 200 ug/mL 于甲醇加標(biāo)50uL
  小柱操作
  嘔吐毒素免疫親和柱(SBHL-20-0347,Beacon 品牌)恢復(fù)室溫后,讓柱內(nèi)緩沖液流完
  上樣:2mL 上樣液加到小柱上面,控制流速1d/s
  淋洗:5mL PBS 溶液 洗滌,5mL 水洗滌
  洗脫:2ml 甲醇洗脫,控制流速1d/s
  甲醇氮吹近干后,加流動(dòng)相定容到1mL。渦旋, 過(guò)濾, 待上機(jī)檢測(cè)。
  色譜條件
  a) 流動(dòng)相: 甲醇:水(2:8)
  b) 色譜柱: CNW Athena C18-WP 液相色譜柱(4.6*150mm,5um)
  c) 流速:1.0mL/min
  d) 柱溫:35℃
  e) 進(jìn)樣體積:20μL
  f) 檢測(cè)波長(zhǎng):218nm
三、實(shí)驗(yàn)譜圖
 
圖1:黃曲霉毒素10ppb 標(biāo)準(zhǔn)品譜圖(黃曲霉檢測(cè))
 
圖2:生茶基質(zhì)譜圖(黃曲霉檢測(cè))
 
圖3:熟茶基質(zhì)譜圖(黃曲霉檢測(cè)) 
 
圖4:生茶基質(zhì)加標(biāo)10ppb 譜圖(黃曲霉檢測(cè))

 
圖5:熟茶基質(zhì)加標(biāo)10ppb 譜圖(黃曲霉檢測(cè))
 
圖6:嘔吐毒素1ppm 標(biāo)準(zhǔn)品譜圖(嘔吐毒素檢測(cè))
 
圖7:生茶基質(zhì)譜圖(嘔吐毒素檢測(cè))
 
圖8:熟茶基質(zhì)譜圖(嘔吐毒素檢測(cè))

圖9:熟茶基質(zhì)加標(biāo)1ppm 譜圖(嘔吐毒素檢測(cè))
四、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
  黃曲霉毒素

目標(biāo)物

生茶基質(zhì)

熟茶基質(zhì)

生茶加標(biāo)10ppb

熟茶加標(biāo)10ppb

生茶加標(biāo)回收率%

熟茶加標(biāo)回收率%

黃曲霉 G2  ng/mL

0

0

3.9

5.9

39%

59%

黃曲霉G1  ng/mL

0

0

7

6.9

70%

69%

黃曲霉B2  ng/mL

0

0

8

8.3

80%

83%

黃曲霉B1ng/mL

0

0

8.7

8.1

87%

81%



  嘔吐毒素

目標(biāo)物

生茶基質(zhì)

熟茶基質(zhì)

熟茶加標(biāo)1ppm

熟茶加標(biāo)回收率 %

嘔吐毒素

0

0

0.92ppm

91.2


五、分析討論

  1、從數(shù)據(jù)上我們可以看出,市面上購(gòu)買的普洱茶生茶和熟茶均沒(méi)有檢測(cè)到黃曲霉毒素和嘔吐毒素。但是限于我們樣品來(lái)源有限,從我們檢測(cè)的樣品來(lái)看,正常渠道購(gòu)買的普洱茶一般都沒(méi)有問(wèn)題,大家可以放心飲用。
  2、黃曲霉毒素B2、B1 的加標(biāo)回收率可以達(dá)到80% 以上,但是G2、G1 平均只有40-70%,不是很穩(wěn)定,后來(lái)經(jīng)過(guò)排查,發(fā)現(xiàn)G2、G1極易降解,隔一段時(shí)間進(jìn)樣,峰面積就會(huì)降低很多,相對(duì)來(lái)說(shuō),B2,B1的回收率比較穩(wěn)定,另外食品中zui容易污染,關(guān)注度zui高的也是黃曲霉毒素B1,并且是毒性zui強(qiáng),致癌性zui強(qiáng)的毒素。嘔吐毒素的回收率非常穩(wěn)定,達(dá)到90%以上。
  3、總體來(lái)說(shuō),免疫親和層析液相色譜-柱后光化學(xué)衍生法檢測(cè)普洱茶中黃曲霉毒素,免疫親和層析凈化液相色譜法檢測(cè)嘔吐毒素是非??煽康姆椒?,目前國(guó)家對(duì)黃曲霉B1的限值,玉米制品為20ppb,稻谷及其制品10ppb,小麥及其制品5ppb,嘔吐毒素在玉米小麥中的限值為1ppm,根據(jù)國(guó)標(biāo)方法,黃曲霉毒素的定量限達(dá)0.5ppb,嘔吐毒素的定量限可以達(dá)到0.2ppm,均低于國(guó)家的限值。
六、黃曲霉毒素和嘔吐毒素檢測(cè)實(shí)驗(yàn)耗材包

 
貨號(hào) 名稱 規(guī)格 品牌
SBHL-20-0383 美國(guó)Beacon黃曲霉毒素總量免疫親和柱(B1,B2,G1,G2) 3mL,20/ Beacon
SBHL-20-0347 美國(guó)Beacon嘔吐毒素免疫親和柱 3mL20/ Beacon
CDGG-116870-17-1ml 黃曲霉毒素B1、B2、G1G2混標(biāo)(GB/T 5009.22-2016)標(biāo)準(zhǔn)品 1 mg/L于乙腈,     1 mlCertan Vial O2SI
CDGG-116870-03 黃曲霉毒素B1、B2G1、G2混標(biāo)(GB/T 5009.22-2016)方法2方法3 標(biāo)準(zhǔn)品 不同濃度于乙腈,   1 mlCertan Vial O2SI
CDGG-014445-06 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(嘔吐毒素) 標(biāo)準(zhǔn)品 200 ug/mL于甲醇,1mL O2SI
LAEQ-461572 Athena C18-WP 液相色譜柱 4.6*150mm,5um CNW
SBHL-YQ-01 凱斯科光化學(xué)衍生器 PCS 凱斯科
SBEQ-CR0002 SPE 小柱連接件【1,3,6mL】,PP 材質(zhì) 12 個(gè)/  CNW
SBEQ-CR1012 CNW 12 位固相萃取真空裝置 12  CNW
SCAA-114  親水PTFE針式濾器  13mm*0.22um, 100 /  ANPEL
SCAA-113 親水PTFE針式濾器  13mm*0.45um, 100 /  ANPEL
QBAA-002012 2ml 無(wú)針注射器 100 /  ANPEL
ABEQ-3300002-25 CNW 50ml 尖底離心管 25/ CNW
ADEQ-2600111 3ml 塑料巴斯德吸管、160mm、未滅菌 500/  CNW
VAAP-32009E-1232A-100 CNW 9mm 透明螺紋口自動(dòng)進(jìn)樣瓶( 帶刻度、書寫) 2ml,12*32mm 9mm,100 /  CNW
VEAP-5394-09FRB-100 兼容Agilent 9mm 藍(lán)色開孔擰蓋、含PTFE/ 橡膠隔墊,Bond 100/  CNW
CAEQ-4-003306-4000 HPLC 級(jí)別通用型乙腈( 也適用于生化,無(wú)水分析領(lǐng)域) 4L CNW
CAEQ-4-003302-4000 HPLC級(jí)甲醇,梯度級(jí) 4L CNW
EOFO-945605 Talboys 基本型旋渦混合器,230V/150W 外形尺寸: 20.3×10.2×14.0cm, 包裝重量:5.3kg Talboys
EDAA-2101TH 超聲波清洗器,100W ( 帶加熱功能)  槽內(nèi)尺寸:  300*150*100mm4L ANPEL

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